کلونینگ و آنالیز مولکولی ژنGenerative Cell Specific 1 (GCS1 در ایزوله های کلینیکی پلاسمودیوم فالسیپاروم ایرانی

یکی از آنتی ژنهای جدید کاندید واکسن ممانعت کننده انتقال مالاریا، پروتئین (Generative Cell Specific 1 (GCS 1 است که درسطح گامتوسیتهای نر پلاسمودیوم بیان می شود. این پروتئین در اینتراکشن گامتها نقش کلیدی بازی می کند. جهت توسعه یک واکسن موثربررسی تنوع ژنتیکی این ژن در ایزوله های مناطق مختلف آندمیک مالاریا و کلونینگ هاپلوتیپ شایع آن جهت بیان و سپس انجام تستهای تکمیلی جهت تایید آن ضروری است. در این مطالعه، آنالیز مولکولی ژنgcs1 در 22 ایزوله کلینیکی پلاسمودیوم فالسیپاروم ایرانی با تکنیکPCR-Sequencingانجام و سپس فرم آللی شایع آن در ناقلpET23aکلون گردید که قادر است فیوژنHis-tagرا درانتهای کربوکسیل بیان نماید. نتایج حاصل از آنالیز مولکولی این ژن نشاندهنده 3 تغییر نوکلئوتیدی بود که منجر به پیدایش 3 هاپلوتیپ در جمعیت شده است. پیشگویی اپی توپهای سلولBخطی و فضایی نشان داد که اپی توپها عمدتاً در مناطق حفظ شده قرار دارند. همچنین کلونینگ و ساب کلونینگ با کلونیPCRهضم آنزیمی باHindIII و BamHIو تعیین توالی تایید گردید. بطور کلی نتایج حاصل از این مطالعه تنوع ژنتیکی بسیار محدودی را در ژنpfgcs1 ایزوله های ایرانی نشان داد و هاپلوتیپ شایع در ناقل بیانی کلون گردید. بنابراین، در فاز بعدی مطالعه می توان از این پلاسمید نوترکیب جهت بیان پروتئینPfGCS1 استفاده نمود. بعلاوه می توان برعلیه این آنتی ژن، پلی کلونال آنتی بادی تولید نمود و کارآیی آنها را در جلوگیری از لقاح گامتوسیتهای پلاسمودیوم فالسیپاروم در بدن پشه آنوفل مورد بررسی قرار داد.

کلیدواژه ها:

واکسن مالاریا ، Generative Cell Specific1 ، آنالیز مولکولی ، کلونینگ