بیان موقت زنجیره سنگین آنتی بادی علیه ویروس هاری در برگ های تنباکو

هاری یک بیماری ویروسی است که اغلب از طریق گزش حیوان هار به انسان منتقل می شود. سالانه ب یش از 10 میلی ون نفر بر ای جلوگیری از مرگ ناشی از گزیدگی، ایمونوگلوبولین ضد هاری به همراه واکسن هار ی دریافت م ی کنند . پیشرفتها ی اخیر در زمینهتکنولوژی آنتی بادی فرصتی برای جایگزینی ایمونوگلوبولین های پلی کلونال با آنتی بادی های منوکلونال اختصاصی ویروس هاری فراهمآورده است. در دو دهه گذشته، سیستم های تولید گیاهی برای تولید آنتی بادی های منوکلونال اثرگذار در ایمن سازی بیماری های ویروسی و باکتریایی، توسعه یافته اند. در سیستم های گیاهی، بیان موقت با واسطه اگروباکتریوم (اگرواینفیلتراسیون) رویکردی ست کهبرای تولید سریع و ارزان پروتئین های نوترکیب مورد استفاده قرار می گیرد. هدف از این مطالعه بررسی بیان موقت زنجیره سنگین آنتیبادی منوکلونال انسانی ضد ویروس هاری با استفاده از روش اگرواینفیلتراسیون، در جهت تولید آنتی بادی منوکلونال می باشد. در مطالعه حاضر، ژن اپتیمایز شده زنجیره سنگین آنتی بادی ضد ویروس هاریHCدر ناقل بیان گیاهیpCAMBIA-1304کلون شد . این ناقل دوتایی به علت دارا بودن ویژگی های مطلوب از جمله اندازه کوچک آن، تعدد زیاد نسخه ها درE.coliو پایداری بالا در اگروباکتریوم، در ترانسفورماسیون گیاهی بکار برده می شود و در این تحقیق برای بررسی ترانسفورماسیون موقت مورد استفاده قرارگرفت. ناقل بیانی حاوی ژن مورد نظر، در باکتریE. coliتکثیر و سپس به باکتریAgrobacterium tumefaciensمنتقل گردید. نتایج همسانه سازی این ژن با استفاده از روش های مولکولیColony PCRهضم آنزیمی و در نهایت توالی یابی مورد تأیید قرار گرفت . ژن HCبا استفاده از روش اگرواینفیلتراسیون، در برگ های تنباکو بیان شد. بیان زنجیره سنگین آنتی بادی ضد هاری در عصاره برگ ها باروش های دات بلاتSDS-PAGEو وسترن بلات تشخیص داده شد. این نتایج نشان می دهد که با استفاده از سیستم بی ان موقت م یتوان پروتئین های ارزشمند دارویی از جمله آنتی بادی های منوکلونال را با موفقیت تولید کرد

کلیدواژه ها:

منوکلونال آنتی بادی انسانی ضد ویروس هاری ، کلونینگ ، بیان موقت ، اگرواینفیلتراسیون ، برگهای تنباکو