کلون و بیان ژن ساب یونیتS1 توکسین بوردتلا پرتوسیس درE.coli

واکسنهای آسلولار بوردتلا پرتوسیس، عامل بیماری سیاه سرفه، شامل یک تا پنج فاکتور بیماریزای باکتری میباشند. توکسین پرتوسیسPTX یکی از مهمترین فاکتورهای بیماریزا بوردتلا از پنج ساب یونیت تشکیل شده که ساب یونیت(ptx-s1) S1 بزرگترین ناحیه توکسین و جزء اصلی کلیه واکسنهای آسلولار می باشد. در ایران سالهاست که واکسن حاوی باکتری کشته شده تولید و مورد استفادهقرار می گیرد. هر چند باعث کاهش مرگ و میر ناشی از بیماری شده اما به دلیل عوارض جانبی و ظهور سویه هایی با آنتی ژنیسته متفاوت و در نتیجه کاهش ایمنی زایی، طراحی و تولید واکسنهایی با پروفایل ایمنی موثر و عوارض جانبی کمتر ضروری است. سویه مورد استفاده در این مطالعه بر اساس نتایج مطالعات ژنوتیپی سویه های بیماریزای بومی انتخاب و پس از استخراجDNAژنومیک با استفاده از پرایمر های اختصاصی قطعهptx-s1 تکثیر شد. قطعهbp810 در جایگاه آنزیمیBamHΙ/NdeIوکتورpET15bکلون و درE.coli DH5αتکثیر و با تعیین توالی تایید شد. بیان در میزبانE.coli BL21 و با غلظتهای مختلفIPTGانجام و بررسی بیان باSDS-PAGEانجام شد. صحت بیان پروتئین مطلوب با وسترن بلات تایید شد. حضور باندkDa28 در ژل اکریلامید و نیز نتیجه وسترن بلات با استفاده ازAnti-His MABتایید کننده بیانPTX-S1 میباشد. سازه بیانی طراحی و تایید شده بر اساس پلی مورفیسم شایع توکسین بوردتلا در سویه های بومی میتواند به عنوان تولید کننده یکی از مهمترین آنتی ژنهای واکسن آسلولار بکار برده و ایمنی زایی پروتئین حاصله در مقایسه با واکسن کنونی مورد ارزیابی قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

بوردتلا پرتوسیس ، واکسن آسلولار ، توکسین