بررسی بیان فاکتور رشد عصبی بتای انسانی در دماها، زمانها و غلظتهای مختلف القاگر

کمپلکس فاکتور رشد عصبی با زیرواحدβ-NGFفعال خود، نقش قابل توجهی را در بقا، حفظ و تمایز سلولهای سیستم عصبی مرکزی ومحیطی ایفا میکند و به همین دلیل در درمان بیماریهای تخریب عصبی مورد توجه قرار گرفته است. جهت مطالعهی هرچه بیشتر توانایی این پروتئین در درمان بیماریهای مختلف از جمله ناهنجاریهای عصبی، مقدار زیادی ازβ-NGFانسانی بصورت نوترکیب و خالص مورد نیاز است.در این تحقیق، زیرواحدβ-NGFانسانی برای اولین بار در ایران بصورت نوترکیب مورد بیان قرار گرفت. توالیcDNA پروتئین β-NGF انسانی پس از بهینهسازی کدونی در وکتور،pET39b(+)با توانایی انتقال پروتئین به فضای اکسید کنندهی پری پلاسمی جهت تشکیل صحیح پیوندهای دی سولفیدی، ساب کلون و به منظور تکثیر و بیان به ترتیب به سویه هایGold10 وBL21(DE3)pLysSانتقال یافت. بیان در غلظتهای0/5یک، دو و سه میلی مولارIPTGبه مدت دو، سه، چهار، پنج، 16 ساعت و شبانه در دماهای 37و27و20درجه سانتیگراد صورت پذیرفت محتوای پروتئینی توسط اوره استخراج گردید. در نهایت از میان شرایط مذکور، بیانβ-NGFانسانی نوترکیب فقط در غلظت یک میلی مولارIPTGدر دمای 20 درجه سانتیگراد و به مدت 16 ساعت با استفاده از تکنیکهایSDS-PAGEدات بلات و وسترن بلات موردتایید قرار گرفت.

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد عصبی ، بیان پری پلاسمی ، پروتئین نوترکیب