کلون و بیان سطح سلولی توام آنزیمهایOPAA و DFPase به منظور تولید سامانهچندکاره تجزیه کننده ترکیبات ارگانوفسفره

ترکیبات ارگانوفسفره که بهصورت حشرهکش، آفتکش و سموم شیمیاییجنگی استفاده میشوند، ازجمله خطرناکترین آلاینده زیستمحیطی میباشند که رفع آلودگی آنها بسیار حائز اهمیت است. یکی از روشهای ایدهآل برای مقابله با این ترکیبات سمی تجزیهآنزیمی میباشد. شناختهشدهترین آنزیمها برای اینمنظور عبارتندازMPH و DFPase ،OPAA ،OPHدر این مطالعه OPAA ازسیتوپلاسم DFPase و (Alteromonas sp.از مغز ماهیمرکبLoligo vulgarisابتدا بهصورت جداگانه بیان سطحی شدند و سپس باهدف کاهش محدودیت جذب و تجزیه طیف وسیعتری از ترکیبات سمی ارگانوفسفره، برای اولینبار بیان سطحی توام دو آنزیم بر سطح یک باکتری با اتصال هر آنزیم به لنگرInaV-Nبررسی گردید. برای انتقال همزمان، ژنهای هدف میبایست در دو پلاسمید مختلف با دومقاومتآنتیبیوتیکی مختلف و بیان مستقل کلون شوند. بنابراین، قطعات ژنیinaV-N/opaa و inaV-N/dfpaseبه ترتیب در وکتورهای pCDFDuet و pET-28a(+)کلون شدند. سلولهای مستعدE.coliبا هر یک از پلاسمیدهای نوترکیب، و هر دو پلاسمید بهطورهمزمان ترانسفورم شدند. مطالعه فعالیت در حضور سلولهای بیانکنندهOPAA/DFPase و OPAA ،DFPaseبه ترتیب 22/46U/ml 13/125 و U/ml،19/676U/ml برای تجزیه دیازینون13/784U/ml 5/213 و U/ml ،10/779U/ml و (P-O bond)برای تجزیهکلرپیریفوسP-O bondرا نشان داد. مطالعه فعالیت بهروش مانیتورینگ فلوراید آزادشده از تجزیه(P-F bond) DFPتوسط یک میلیگرم وزنتر سلولهای بیانکنندهOPAA/DFPase و OPAA ،DFPaseبه ترتیب فعالیی برابر با 500و250 و 800 واحد را نشان دادیافتههای فوق بیان میکند سوش نوترکیبOPAA/DFPaseطیف سوبسترایی وسیعتر و فعالیت سلولی بیشتری نسبت به سوشهای تک آنزیمی دارد و یک کاندید مناسب برای تجزیه محیطهای آلوده به انواع مختلف ترکیبات ارگانوفسفره میباشد

کلیدواژه ها:

بیان همزمان ، Organophosphorus Acid Anhydrolase (OPAA) ، Diisopropyl-fluorophosphatase (DFPase) ، ترکیبات ارگانوفسفره