تولید زیرواحد بتای فاکتور رشد عصبی انسانی بصورت نوترکیب در دو سویهی باکتریایی اشرشیا کلی

فاکتور رشد عصبی بتا β-NGFبه خانوادهی نوروتروفینها تعلق دارد و برای اولین بار بدلیل نقش حیاتیاش در رشد و بقای سلولهای عصبی مورد مطالعه قرار گرفت. این پروتئین نقش اساسی را در درمان بیماریهایی نظیر مالتیپل اسکلروزیس، آلزیمر، پارکینسون و غیره ایفا میکند. به منظور درمان این بیماران، تولید باکتریاییβ-NGFانسانی نوترکیب در مقیاس زیاد مورد توجه قرار گرفته است. بنابراین دراین تحقیق، پروتئین مذکور برای اولین بار در ایران در دو سویه از باکتریE.coliبیان شد. از آنجاییکه سیتوپلاسمE.coliبعلت حضور آنزیمهای ردوکتاز و عوامل احیا کننده برای تشکیل پروتئین دارای پیوندهای دی سولفیدی مناسب نمیباشدβ-NGFمیبایست جهت تشکیل پیوندهای دی سولفیدی لازم برای پیچش به محیط اکسید کنندهی پری پلاسم انتقال یابد در این تحقیقβ-NGF cDNAانسانی از بانک اطلاعاتیNCBIاستخراج و پس از بهینهسازی کدونی در وکتورpET39b(+)حاوی توالی پپتید نشانه و ژن دی سولفید ایزومرازA جهت ترشح به فضای پری پلاسمی ساب کلون گردید. وکتور مذکور به روش ترنسفورماسیون بهسویههایBL21(DE و ( 3 BL21(DE3)pLysSباکتریE.coliمنتقل شد و بیان همزمان با استفاده از غلظت یک میلی مولارIPTGصورت گرفت. کل محتوای پروتئینی با استفاده از اوره استخراج گردید در نهایت، بیان ژنβ-NGFبعنوان یک فیوژن پروتئین با استفاده از تکنیکهایSDS-PAGEو دات بلات مورد تایید قرار گرفت.

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد عصبی ، بیان پری پلاسمی ، پروتئین نوترکیب ، اشرشیا کلی