کلونینگ وبیان آنتی ژن LmSTI 1 انگل لیشمانیا در مخمر ساکارومیسس سرویزیه

انگلهای لیشمانیا عامل بیماریهای عفونی لیشمانیوز میباشند که منجر به طیف وسیعی از اختلالات شامل ضایعات پوستی تا عفونت سیستمیک کشنده میشوند. مطالعات اولیه بیان آنتیژنهای مختلف انگل لیشمانیا و همچنین بیان پروتئینهای هترولوگ را در زمینههای تشخیصی و واکسنسازی مورد برسی قرار دادهاند. در این مطالعه امکان بیان ژنLmSTI1پروتئین شوک حرارتی لیشمانیا ماژور) درمخمر ساکارومیسسسرویزیه مورد بررسی قرار گرفته است. به این منظور ژنLmSTI1سویهMHRO/IR/75/ERاستخراج وکلون شده در وکتورpUC18شکری و همکاران)، به صورت یک قطعه 1641 جفت بازی دارای محل شناسایی آنزیمهای محدودکننده EcoRI و BamHIبه ترتیب در ابتدا و انتهای قطعه، به روشPCRتکثیر یافت. قطعه تکثیر یافته در وکتورpYES2 با همان موقعیت آنزیمی و تحت کنترل پروموترGAL1 کلون و در باکتریEcoliسوشDH5αترانسفورم گردید. کلنی باکتریهای نوترکیب در محیط حاوی آمپیسیلین غربالگری و وکتور نوترکیبpYES-LmSTI1 از طریق واکنشهای آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرارگرفت. وکتورpYES-LmSTI1 تائید شده از طریق الکتروپوریشن به سلولهایINVCs1-URAمخمری ترانسفورم گردید. کلنیهای مخمری ترانسفورم یافته در محیطYNBحاوی گلوکز و فاقد اوراسیل انتخاب شده و با انجامBack transformation و PCR بررویDNAاستخراج شده از این مخمرها با کمک دانههای شیشهای، مورد تائید بیشتر قرار گرفتند. القاء بیان ژن با استفاده از محیط حاوی گالاکتوز صورت گرفت و 12%SDS-PAGEو وسترن- بلاتینگ بر روی پروتئینهای استخراج شده نشان از بیان ژنLmSTI1در ساکارومیسس سرویزیه و در اندازهی مورد انتظار است که میتواند در زمینههای تشخیصی و واکسنسازی مورد استفاده قرار بگیرد

کلیدواژه ها:

بیان ، لیشمانیا ، LmSTI1 ، مخمر