تولید و بیان پروتئین نوترکیب فاکتور فعال کننده نوتروفیلی (HP-NAP) در میزبان بیانی E.coli BL21 و ساخت نانوذرات کیتوزان حامل آن درشرایط آزمایشگاهی

اهداف: سرطان سینه از علل عمده مرگ و میر زنان در سراسر جهان می باشد. درمانهای دارویی متعارف با استفاده ازداروهای سیتوتوکسیک دارای سطح بالایی از عوارض جانبی برای بیمار است. بنابراین امروزه محققین به دنبال درمان جایگزین با اثرات جانبی کم و حداکثر بهره وری می باشند. فاکتور فعال کننده ی نوتروفیلی (HP-NAP) یکی از پروتئینهای مهم هلیکوباکتر پیلوری است. این پروتئین به عنوان یک فاکتور کموتاکتیک عمل کرده و موجب تولید رادیکال های آزاد و کموکاین ها می شود. HP-NAP دارای خاصیت ایمونومدولاتوری بوده و سبب القای بیان IL12 و IL23 از مونوسیت ها و نوتروفیل های انسانی می گردد. هدف از این مطالعه بررسی میانکنش پروتئین نوترکیب HP-NAP هلیکوباکترپیلوری بر مدل سرطانی سینه می باشد. مواد و روش ها: وکتور pet28a حامل ژن napA در میزبان کلونینگ E.coli DH5α ترانسفرم شد. سپس وکتور نوترکیب Pet28a/napA با استفاده از محلول 1/5 میلی مولار IPTG در میزبان بیانی E.coli BL21 القا شد. پروتئین تولید شده با استفاده از SDS-PAGE بررسی شده و پس از تخلیص با ستون کروماتوگرافی نیکل با استفاده از تکنیک وسترن بلاتینگ تایید شدند. نانوذرات کیتوزان تولید شد. سایز ذرات با دستگاه DLS میکروسکوپ الکترونی ارزیابی شد. پروتئین نوترکیب فاکتور فعال کننده نوتروفیلی (HP-NAP) در نانوذرات کیتوزان اینترپپ شد. یافته ها: بررسی بر روی الکتروفورز SDS-PAGE پروتئینی با وزن 20 کیلودالتون را نشان داد. در نهایت پس از تخلیص پروتئین تولید شده توسط وسترن بلات تایید شد. با دستگاه DLS و میکروسکوپ الکترونی سایز نانوذرات در حدود 150 تا 200 نانومتر تائید شد. نتیجه گیری: بیان پروتئین تولید شده توسط ژن napA مورد تایید قرار می گیرد. این پروتئین با داشتن پتانسل تغییر پاسخهای سیستم ایمنی، سبب تغییر فنوتیپ از Th2 به فنوتیپ Th1 به واسطه تولید اینترفرون گاما و فاکتور نکروز دهنده توموری آلفا میشود و ممکن است ابزار مناسب و موثر جهت درمان سرطان در آینده باشد.

کلیدواژه ها:

هلیکوباکتر پیلوری ، ژن napA ، بیان