کلونینگ آنزیم فیتاز Peniophoralycii حاوی برچسب هیستیدیندر مخمر

مقدمه:فیتیک اسید، یکی از ترکیبات معدنی بسیار مهمی است که در درون گیاهان ذخیره می شود. فیتاز( E.C 3.1.3.8 یا E.C. 3.1.3.26 ) به صورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی جهت افزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک معده ای به غذای آنها اضافه شده و بدین ترتیب سبب کاهش دفع فسفات به داخل محیط میگردد. هدف:کلونینگ و افزودن برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب فیتاز در باکتری اشرشیاکلی و سپس مخمر،به منظور خالص سازی آنزیم تولید شده در مقادیر بالا در این میزبان می باشد. روش مطالعه:توالی پروتئینی آنزیم فیتازقارچ P.lycii ازبانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدونی مخمر، توالی ژن طراحی و سنتز گردید. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل وکتور دوگانه ی pFPMTMFα اضافه شده و در نهایت با استفاده از الکتروپوریشن به داخل مخمر انتقال یافت. یافته ها: سازه ی نوترکیب حاوی ژن فیتاز به همراه برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین تولید شد. حضور ژن در داخل باکتری و مخمربا استفاده از روشهای هضم آنزیمی و PCR تا یید گردید. بحث و نتیجه گیری: کلونینگ موفق ژن فیتاز قارچی حاوی برچسب شش هیستیدین، در باکتری اشرشیاکلی و مخمربه منظور بیان و سپس خالص سازی این آنزیم،انجام شد.

کلیدواژه ها:

فیتیک اسید ، فیتاز ، برچسب هیستیدین ، مخمر ، کلونینگ