<span lang="FA">طراحی بیوانفورماتیکی و تایید بیان کلراتوکسین <span dir="LTR">B<span lang="FA">- لینکر- انتروتوکسین <span dir="LTR">A<span lang="FA">- لیگاند در گونه صنوبر <span dir="RTL" lang="AR-SA">(Populus euramericana (Dode) Guinier<span dir="RTL" lang="AR-SA">)

مقدمه: با توجه به افزایش مقاومت دارویی، نیاز به شناسایی داروهای ضدسرطانی جدید و یافتن راهبردهای درمانی نو برای مقابله با آنها افزایش یافته است. بسیاری از باکتری ها پپتیدهایی به نام توکسین تولید می کنند که دارای اثرهای ضدتوموری بر برخی رده های سلول های سرطانی هستند. با وجود پیشرفت های فراوان در زمینه درمان سرطان، محدودیت های موجود در روش ها و ترکیبات ضدسرطانی متداول، توجه محققان را به ترکیبات ضدسرطانی طبیعی، به ویژه انتروتوکسین ها، معطوف کرده است. هدف این پژوهش طراحی و تایید بیان پروتئین فیوژنAnticancer-cTxB-linker-enTA-Ligand در گونه صنوبر، یکی از اقتصادی ترین درختان جهان است. این گونه به دلیل رشد سریع، از ارزش اقتصادی بالایی برخوردار است و برای سرمایه گذاری میان مدت و بلندمدت استفاده می شود.مواد و روش ها: به منظور طراحی پروتئین مدنظر، ابتدا توالی انتروتوکسین A و کلراتوکسین B از پایگاه داده ژنومی NCBI استخراج شد. سپس یک توالی لینکر، برای افزایش انعطاف پذیری و نگهداری ساختار بین دو توالی انتروتوکسین قرار گرفت و یک توالی ضدسرطانی برای افزایش خاصیت ضدتوموری به ژن اضافه شد. در نهایت ژن فیوژن نوترکیب سنتز شد و مراحل بیان و تخلیص انجام گرفت. بیان پروتئین نوترکیب مدنظر با SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد.یافته ها: نتایج نشان داد که پروتئین فیوژن طراحی شده از ساختار مناسب و پایداری فیزیکوشیمیایی مطلوبی برخوردار است و در شرایط شبیه سازی شده آبی مقاومت زیادی از خود نشان می دهد. افزون بر این، موفقیت انتقال وکتور نوترکیب با استفاده از کلنی PCR تایید شد و مشاهده باند واضح ۲۳۸ جفت باز، نشان دهنده حضور ژن فیوژن نوترکیب بود. نتایج SDS-PAGE و وسترن بلات نیز به وضوح بیان موفقیت آمیز پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی ۴۷ کیلودالتون را در برگ های صنوبر تایید کردند.نتیجه گیری: پروتئین فیوژن حاصل از ترکیب انتروتوکسین A و کلراتوکسین B به همراه توالی ضدسرطانی، خواص ضدتوموری چشمگیری دارد. از این رو، ارزیابی های پیش بالینی، شامل آزمون های حیوانی، به منظور ارزیابی امکان استفاده از این ترکیب به عنوان راهکار مکمل یا جایگزین در درمان سرطان در حال انجام است.

کلیدواژه ها:

انتروتوکسین ، آگرواینفیلتراسیون ، فعالیت ضدسرطانی