<span lang="FA">تغییر بیان ژن های <span dir="LTR">exo<span lang="FA"> در جدایه های بالینی سودوموناس آئروژینوزای مقاوم به آنتی بیوتیک تحت تیمار با متابولیت های گیاهی (آلیسین و تیمول)

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژینوزا به دلیل پتانسیل بیماریزایی بالا، عامل شایع عفونت های بیمارستانی است. گسترش مقاومت های آنتی بیوتیکی به ویژه در باکتری های گرم منفی سبب شده است، به دست آوردن ترکیبات آنتی بیوتیکی گیاهی در درمان عفونت های ناشی از این باکتری ها مورد توجه قرار گیرد. در این تحقیق اثرات ضدمیکروبی ماده موثره آلیسین سیر و تیمول موجود در تعدادی از گیاهان دارویی از جمله آویشن بر روی بیان ژن های exoA، exoS وexoT سودوموناس آئروژینوزا به عنوان عوامل مهم بیماری زا مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: تعداد ۵۰ جدایه بالینی باکتری از بیماران مختلف به همراه سویه استاندارد سودوموناس آئروژینوزا ATCC۲۷۸۵۳ مورد بررسی قرار گرفتند و برای خالص سازی باکتری تست های بیوشیمیایی مختلف شامل بررسی قابلیت تولید همولیزین، اکسیداز، کاتالاز، اوره آز، قابلیت رشد در دمای ۴۲ درجه سلسیوس، منظره رشد در محیط های مک کانکی، TSI و SIMو مولر هینتون انجام شد و با رنگ آمیزی گرم بررسی شدند و تست آنتی بیوگرام بر روی محیط کشت مولر هینتون آگار همراه با تعیین حساسیت سودوموناس آئروژینوزا به روش دیسک دیفیوژن بر روی آنتی بیوتیک های سفپیم، جنتامایسین، آمیکاسین، سفتازیدیم، امی پنم و سیپروفلوکساسین (بر اساس جدول CLSI) و دیسک های آغشته به متابولیت آلیسین و تیمول در محیط کشت انجام شد و پس از آن هاله عدم رشد باکتری ها اندازه گیری گردید، در ادامه حداقل غلظت مهاری و باکتری کشی (MIC وMBC)، ارزیابی و استخراج DNA، RNA، سنتز cDNA و در نهایت Real-time PCR جهت تعیین اثر دو ماده موثره گیاهی، آلیسین و تیمول، بر بیان ژن های exoA ، exoS وexoT در غلظت زیر مهاری (subMIC) انجام پذیرفت. یافته ها: از مجموع ۵۰ جدایه بالینی مورد بررسی، ۴۰ جدایه سودوموناس آئروژینوزا مورد شناسایی و تایید قرار گرفت. میانگین قطر هاله عدم رشد جدایه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا در غلظت ۱۰ میلی گرم بر میلی لیتر آلیسین و تیمول، به ترتیب، ۲/۱۹ و ۱۷ میلی متر به دست آمدند. بیش ترین مقاومت باکتری های سودوموناس در مقابل آنتی بیوتیک های سفتازیدیم و امیپنم و کم ترین مقاومت در مقابل آمیکاسین و جنتامایسین بود. رقت ۱:۸، غلظت ۲۵/۱ میلی گرم بر میلی لیتر آلیسین و تیمول، نماینده MIC و رقت ۱:۲، غلظت ۵/۲ میلی گرم بر میلی لیتر آلیسین و تیمول، بیان گر MBC بود. حضور ژن های exo مورد بررسی در جدایه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا در محصولPCR ژنوم باکتری استخراج شده با پرایمرهای اختصاصی هر ژن تایید شد. نتایج به دست آمده از Real-Time PCR نشان داد که آلیسین در غلظت زیرمهاری (۶/۰ میلی گرم بر میلی لیتر) در این مطالعه باعث کاهش بیان ژن های exoA، exoS وexoT در جدایه های سودوموناس آئروژینوزا می شود. آنالیز داده ها نشان داد بیان ژن های exoT و exoS در جدایه های سودوموناس آئروژینوزا تحت تیمار با آلیسین، با ۰۰۱/۰P< و ژن exoA، با ۰۱/۰P<، به طور معنی دار کاهش پیدا کرده است. هم چنین بیان ژن های exoA و exoS در جدایه های سودوموناس تحت تیمار با ماده موثره تیمول در غلظت subMIC (۶/۰ میلی گرم بر میلی لیتر) به طور معنی دار (۰۰۱/۰P<) کاهش پیدا کرد. نتیجه گیری: این تحقیق نشان داد متابولیت های گیاهی آلیسین در سیر و تیمول در آویشن، با اثر باکتری کشی قابل توجه، باعث کاهش بیان ژن های exo در سودوموناس آئروژینوزا می شوند. امید است نتایج به دست آمده از این تحقیق در آینده، بعد از انجام تحقیقات بالینی استاندارد، منجر به تولید دارویی حاوی ماده موثره آلیسین و تیمول با اثر ضدباکتریایی قوی شوند.

کلیدواژه ها:

Real-Time PCR ، subMIC ، exoA ، exoS ، exoT