بررسی تاثیر آلفا-آمانیتین بر تکثیر سلول های HepG۲ کشت داده شده بر غشای آمنیونی حاوی سلول HUVEC

سابقه و هدف: استفاده از داروهای شیمیایی به منظور درمان سرطان کبد دارای عوارض جانبی متعددی می باشد. ازاین رو استفاده از دارویی که با عوارض کمتر بتواند بر زنده مانی سلول های سرطانی تاثیرگذار باشد از اهمیت به سزایی برخوردار است.  هدف از مطالعه حاضر، بررسی تاثیر مهاری آلفا-آمانیتین بر سلول های HepG۲ می باشد. مواد و روش­ها: در این مطالعه، کشت سلول های HepG۲ بر روی پرده آمنیون حاوی HUVEC انجام شد و پس از تیمار با آلفا-آمانیتین، زنده مانی سلول ها با استفاده از تست MTT و میزان آپوپتوز با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری بررسی شد. تعیین کمیت مالون دی آلدهید (MDA)، میزان فعالیت آنزیمی سوپراکسید دیسموتاز (SOD)، وضعیت اکسیدانی کل (TOS) و ظرفیت آنتی اکسیدانی کل (TAC) با استفاده از روش کالریمتری انجام شد. ارزیابی میزان فاکتور نکروز تومور آلفا (TNF-α) با تکنیک ایمونوسیتوشیمی (ICC) انجام شد. یافته ها: نتایج تست MTT نشان داد که تیمار سلول های HepG۲-Amnion و HepG۲-Amnion-HUVEC با غلظت های ۲۵۰ و ۵۰۰ پیکوگرم بر میلی لیتر داروی آلفا-آمانیتین باعث کاهش معنادار زنده مانی سلول های HepG۲ شد. همچنین نتایج فلوسایتومتری نشان داد که بروز آپوپتوز در سلول های HepG۲-Amnion-HUVEC و HepG۲-Amnion تیمارشده با آلفا-آمانیتین به طور معناداری افزایش یافته است. نتایج آزمون بیوشیمیایی افزایش میزان MDA، TOS و کاهش سطح SOD و TAC را در هر دو گروه هم کشتی شده با آمنیون و Amnion-HUVEC و تیمارشده با آلفا-آمانیتین را نشان داد. نتایج ICC نشان داد که  میزان بیان پروتئین TNF-α در هر دو گروه تیمارشده با آلفا-آمانیتین افزایش معناداری داشته است. نتیجه گیری: استفاده از غشای آمنیونی برای کشت سلول های HepG۲ می تواند سبب تاثیر ضدسرطانی قابل توجه آلفا-آمانیتین بر این نوع سلول ها شود.

کلیدواژه ها:

Alpha-Amanitin ، Hepatocellular Carcinoma ، Amniotic Membrane ، Apoptosis ، TNF-α ، HepG۲ ، آلفا-آمانیتین ، سرطان کبد ، پرده آمنیون ، آپوپتوز ، TNF-α ، HepG۲ .