بیان نوترکیب، خالص سازی نسبی و ارزیابی ویژگی های بیوشیمیایی سرین پروتئاز قلیایی سویه AF-۲۰۰۴TSalinivibrio proteolyticus جدا شده از دریاچه فوق شور بختگان

پروتئازها به عنوان یکی از پرکاربردترین آنزیم های صنعتی در شکستن مولکول های پروتئین و تبدیل آن به پپتیدها و آمینواسیدها نقش دارند. سرین پروتئازها که جزو اندوپپتیدازها به حساب می آیند خود به چهار زیرگروه تقسیم می شوند که در میان آنها سرین پروتئازهای قلیایی از نظر صنعتی مهم ترین گروه محسوب می شوند. در این مطالعه، ژن سرین متالوپروتئاز قلیایی از سویه Salinivibrio proteolyticus از دریاچه فوق شور بختگان کلون و بیان نوترکیب شد. نتایج به دست آمده، تولید یک پروتئین منومر با وزن مولکولی حدود ۶۶ کیلودالتون را تایید کرد. نتایج این پژوهش نشانگر عدم تاثیر معنی دار پلاسمیدهای چاپرونی بر روی بیان محلول پروتئاز مورد مطالعه است و حتی در صورت استفاده فرایند تخلیص پروتئین را به دلیل وجود مقادیر بالای پروتئین های چاپرونی در فاز محلول مختل می کند. سنجش فعالیت آنزیم به روش زایموگرافی و همچنین با محلول Folin-Ciocalteu نشان دهنده  فعالیت پروتئازی آن بر روی سوبسترای کازئین بود. با مشاهده اثر مهارکنندگی EDTA با غلظت ۱ میلی مولار  به عنوان مهار کننده متالوپروتئازها و اثر کاهندگی فعالیت آنزیم در حضور PMSF با غلظت ۱ میلی مولار به عنوان مهار کننده سرین پروتئازها چنین نتیجه گیری می شود که پروتئاز مورد بررسی به دسته سرین متالوپروتئازها تعلق دارد. همچنین، فعالیت پروتئولیتیکی آنزیم بر روی سوبسترای کازئین با غلظت ۶۵/۰ درصد، بر اساس نتایج اسپکتروفتومتر و با استفاده از منحنی استاندارد ال-تیروزین به میزان ۰۸/۰±۶۵/۱ واحد در میلی گرم محاسبه شد. در نهایت باید برای دست یابی به فعالیت ویژه بهینه آنزیم ارزیابی شرایط مختلف واکنش مانند دما و pH بهینه و یون های فلزی مطلوب آن مد نظر قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

اندوپپتیداز ، زایموگرافی ، آنزیم صنعتی