طراحی و ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص یرسینیا پستیس بوسیله PCR

زمینه: یرسینیا پستیس، عامل طاعون، باکتری گرم منفی، غیر متحرک و کند رشد متعلق به خانواده انتروباکتریاسه می باشد. بر اساس طبقه بندی CDC این باکتری به دلیل نرخ بالای مرگ و میر و انتقال آسان انسان به انسان در دسته A عوامل بیوتروریسمی قرار گرفته است. علی الرغم حساسیت و دقت بالای PCR، ممکن است نتایج منفی کاذب به علت وجود مهارکننده موجود در نمونه های بالینی مشاهده شود. هدف از این مطالعه ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص اختصاصی یرسنیا پستیس می باشد. روش کار: در این پژوهش، پرایمرهای تشخیصی بر اساس ناحیه حفاظت شده ای از ژن های caf۱ و pla توسط نرم افزار Allele ID ۷.۶ طراحی گشت. پرایمرهای هیبرید برای کنترل داخلی با استفاده از توالی ژن AOX۱ مخمر پیکیا پاستوریس و ژن هدف طراحی شد. واکنش PCR بر روی DNA ژنومیک یرسینیا پستیس انجام گشت. محصول آن جهت ساخت کنترل داخلی در وکتور pTZ۵۷R/T قرار گرفت. سپس، عملکرد کنترل داخلی توسط پرایمرهای تشخیصی مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: در الکتروفورز محصول PCR ژن های caf۱ و pla به ترتیب باندهایی به طول ۱۱۷ و ۱۳۶ جفت باز و نتیجه تکثیر کنترل داخلی caf۱-IC و pla-IC به ترتیب قطعاتی با طول ۲۲۷ و ۲۵۰ جفت باز  رویت گردید، بنابراین محصول کنترل داخلی از نظر اندزه اختلاف مناسبی با محصول ژن های هدف دارا می باشد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد کنترل مثبت داخلی ابزاری موثر برای جلوگیری از نتایج منفی کاذب و تایید صحت نتایج می باشد. واژگان کلیدی: یرسینیا پستیس، طاعون، PCR، کنترل داخلی