شناسایی گونه های آسپرژیلوسی با کاربرد تک آنزیم محدودساز MwoI در روش RFLP مبتنی بر آمپلیفیکاسیون ناحیه ژنی rDNA

مقدمه: گونه های آسپرژیلوس بعضا با بیماریهای انسان مرتبط هستند. یافتن یک روش دقیق و سریع برای شناسایی این قارچها اهمیت ویژه-ای دارد و می تواند در غربالگری بیماری و اهداف اپیدمیولوژیک موثر باشد. بحث و نتیجه گیری: روش PCR-RFLP مبتنی بر ژن DNA ریبوزومی، برای تعیین گونه های آسپرژیلوسی مورد استفاده قرار گرفت. کاربرد آنزیم محدودساز MwoIما را قادر نمود که بیشترین افتراق را در بین گونه های آسپرژیلوسی ایجاد نماییم و گونه های مهم آسپرژیلوسی را در مدت زمان کوتاهی شناسایی کنیم. یافته ها: ما موفق به شناسایی هشت گونه مهم آسپرژیلوس شامل: آسپرژیلوس فلاووس، آسپرژیلوس نایجر، آسپرژیلوس فومیگاتوس، آسپرژیلوس ترئوس، آسپرژیلوس کلاواتوس، آسپرژیلوس اکراسئوس، آسپرژیلوس آمستلوئیدامی و آسپرژیلوس نیدولانس با کاربرد روش مولکولی آزمون شدیم. شناسایی و افتراق مهمترین گونه های آسپرژیلوس بدست آمده از کشت کوتاه مدت ۳۶ ساعته و استفاده از پروفایل معرفی شده شامل استخراج DNA، PCR و هضم آنزیمی برای تقریبا تمام نمونه های آزمون شده زمانی در حدود یک روز کاری نیاز داشت. مواد و روش ها: نمونه های ما شامل گونه های مختلف آسپرژیلوسی از نمونه های بالینی و محیطی چهار بیمارستان آموزشی بودند. آسپرژیلوس ها ابتدا با روش مورفولوژیک شناسایی شدند. توده های میسلیومی آسپرژیلوسی از کشت های سابورود براث استخراج شده برای استخراجDNA به روش فنل کلروفرم- گلاسبید مورد استفاده قرار گرفتند. آمپلیفیکاسیون ژن rDNA با استفاده از پرایمر های یونیورسال ناحیه ITS انجام شد و محصولات واکنش زنجیره ای قابل هضم با آنزیم محدودساز MwoI با استفاده از روش PCR- RFLP مورد تفکیک قرار گرفتند.

کلیدواژه ها:

Aspergillus ، Amplification ، Restriction enzyme. ، آسپرژیلوس ، آمپلیفیکاسیون ، آنزیم محدودساز.