مقایسه میزان تولید پروتئین نوترکیب در دو رده سلولی CHO و MCF۷

مقدمه: هدف ازمطالعه ی حاضر، مشخص نمودن رده سلولی مناسب تر، جهت مطالعات تولید پروتئین در سیستم های یوکاریوتی می باشد. پس از ترانسفکشن، تغییرات ایجاد شده در سطوح بیانیRNA و پروتئین نوترکیب هدف ارزیابی شد. مواد و روش ها: به منظور بررسی بیان ژن مورد نظر و تولید پروتئین نوترکیب E۶ پاپیلوما ویروس انسانی تیپ ۱۶ در سلول های مورد آزمایش، از پلاسمید نوترکیب pcDNA۳-E۶ و نیز دو رده سلولی متفاوت MCF۷ و CHO استفاده گردید. به این منظور به دنبال ترانفکشن، بیانRNA و پروتئین هدف بوسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز معکوس (RT-PCR) و آزمایش لکه گذاری وسترن با استفاده از ژل SDS-PAGE و مونوکلونال آنتی بادی Anti-E۶ ارزیابی گردید. یافته ها: در این مطالعه به دلیل غلظت بسیار پایین پروتئین تولیدی در سلول های MCF۷ ، آزمایش RT-PCR مثبت و آزمایش وسترن بلاتینگ آن منفی شد، این در حالی است که در رده سلولی CHO هر دو آزمایش ذکر شده مثبت شدند بحث و نتیجه گیری: با توجه به نتایج بدست آمده توصیه می شود از سلول CHO به منظور ترانسفکشن و تولید پروتئین نوترکیب در سیستم هایی که تولید بالای پروتئین امکان پذیر نیست استفاده گردد

کلیدواژه ها:

Transfection ، MCF۷ ، CHO ، RT-PCR ، Western blotting ، ترانسفکشن ، MCF۷ ، CHO ، RT-PCR ، وسترن بلاتینگ.