تولید رده سلولی ناک اوت IDUA توسط تکنیک ویرایش ژنی CRISPR/Cas
محل انتشار: مجله یافته، دوره: 22، شماره: 4
سال انتشار: 1399
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 59
فایل این مقاله در 8 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_YAFTE-22-4_014
تاریخ نمایه سازی: 18 آبان 1404
چکیده مقاله:
مقدمه: موکوپلی ساکاریدوز تیپ (MPSI) I بیماری شایع ذخیره ای لیزوزومی است که به واسطه کمبود آنزیم آلفا-ال – ایدورونیداز (IDUA) بر روی کروموزوم ۴ (۴p۱۶.۳) ایجاد می گردد. این آنزیم در تجزیه گلیکوزآمینوگلیکانها یا موکوپلی ساکاریدهای درماتان سولفات و هپاران سولفات دخالت دارد و نقص در آنزیم مذکور منجر به افزایش سطح گلیکوز آمینو گلیکان ها (GAG) در خون و تجمع آن در اعضای مختلف بدن می شود. این ترکیبات پروتئوگلیکانی زیربنای ساختاری ماتریکس خارج سلولی و ساختار غضروفی نقاطی مثل مفاصل، دریچههای قلبی را فراهم مینماید؛ بعلاوه در تنظیم ارتباطات سلولی نقش دارد. در این مطالعه ما سیستم CRISPR/Cas را طراحی کردیم که ژن کد کننده انزیم IDUA را مورد هدف قرار داده است و ما توانستیم سلوهای ناک اوت این ژن را تولید کنیم.
مواد و روش ها: ابتدا sgRNA هدف IUDA در پلاسمید px۳۳۵ کلون شد، با استفاده از نقشه برداری محدودکننده، پلاسمید نوترکیب تایید شد. سپس پلاسمید نوترکیب به رده سلولی اپیتلیال انسانی، HEK-۲۹۳ ترانسفکت شد. کلون های جهش یافته توسط آنالیز melting غربالگری شدند و جهش آنها با تعیین توالی سنگر مشخص شد.
یافته ها: هضم آنزیمی و تعیین توالی سنگر، القای جهش ایندل را در دو کلون هتروزیگوت و یک کلون هموزیگوت تایید کرد.
بحث و نتیجه گیری: در این مطالعه، ما با استفاده از سیستم CRISPR-Cas۹ یک مدل سلولی سندرم هورلر تولید کردیم که این مدل می تواند جهت استفاده در رویکرد های درمانی این بیماری استفاده شود.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
علی حاتمی بردر
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
محسن عظیمی نژاد
Department of Basic Medical Sciences, Neyshabour University of Medical Sciences, Neyshabour, Iran.
مجتبی جعفری نیا
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
حمید رضا گودرزی
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
مجید مجرد
Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
