تاثیر ساختار CAR در سازه های مبتنی بر نانوبادی بر توانایی سیتوتوکسیک سلول های CAR-T علیه سلول های +CD۱۹

چکیده سابقه و هدف  در سال های اخیر، درمان با سلول های T مهندسی شده با گیرنده کایمریک (CAR-T) تحولی چشمگیر در درمان سرطان های خونی، به ویژه بدخیمی های B سلول مانند ALL و لنفوم های غیر هوچکینی ایجاد کرده است. بیشترCARها از ناحیه متغیر زنجیره آنتی بادی ها ((scFvs) single-chain variable fragments) به عنوان بخش شناسایی کننده آنتی ژن استفاده می کنند، اما محدودیت هایی مانند پایداری پایین، تجمع ناپایدار و ایمنی زایی بالا، توجه ها را به سوی جایگزین هایی مانند نانوبادی ها (VHH) جلب کرده است. در این مطالعه، سلول های CAR-T  مجهز به گیرنده نانوبادی ضد CD۱۹  طراحی و ساخته شد و توانایی اختصاصی آن ها در شناسایی و حذف سلول های CD۱۹⁺ در شرایط آزمایشگاهی مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها در این مطالعه تجربی، ساختار CAR حاوی نانوبادی ضد CD۱۹ طراحی و در قالب نسل دوم و سوم، با دومین های CD۲۸ و ۴-۱BB ساخته شد. سازه ها در وکتور لنتی ویروسی کلون شده و به سلول هایT  انسانی ترانسداکت شدند. پس از بررسی راندمان ترانسداکشن با فلوسیتومتری، عملکرد سلول های مهندسی شده در مواجهه با سلول های +CD۱۹ از نظر بیان مارکرهای فعال سازی، ترشح سیتوکاین (اینترفرون-گاما و اینترلوکین-۲) و سمیت سلولی ارزیابی شد. تحلیل داده های تجربی با استفاده از نرم افزار GraphPad prism و مقایسه گروه ها با آزمون های ANOVA یک طرفه و دو طرفه و آزمون t انجام شد. یافته ها سلول های CAR-T تولید شده بیان بالایی از گیرنده را نشان داده و در مواجهه با سلول های +CD۱۹، پاسخ سیتوکاینی و سمیت اختصاصی داشتند. در مقابل، نسبت به سلول های -CD۱۹ پاسخ نداشتند. تفاوت عملکرد بین لولاهای کوتاه و بلند و نیز بین نسل دوم و سوم نشان دهنده اهمیت طراحی ساختاری در بهینه سازی عملکرد است. نتیجه گیری             این مطالعه که توسط نخستین تیم پژوهشی در ایران توسعه دهنده سازه های CAR مبتنی بر نانوبادی ضد CD۱۹ انجام شد، نشان می دهد این رویکرد می تواند جایگزینی ایمن و کارآمد برای scFv-CAR ها باشد و چشم انداز عملی برای بهبود درمان های مبتنی بر سلول های CAR-T فراهم کند.

کلیدواژه ها:

CAR T-Cell Therapy ، Single-Chain Antibodies ، CD۱۹ Antigen ، CAR-T سل تراپی ، آنتی بادی های تک دومینی ، آنتی ژن CD۱۹