راه اندازی روشReal Time PCR TaqMan جهت تعیین میزان بار پرووایرال ویروس HTLV-۱ با استفاده از ژن HBZ

چکیده سابقه و هدف  ویروس HTLV-۱ اولین رتروویروس انکوژن انسانی است که با بیماری های ATL و HAM/TSP مرتبط می باشد. ژن HBZ به عنوان یکی از ژن های کلیدی این ویروس، به دلیل ایمنی زایی پایین و پایداری ژنتیکی، نقش مهمی در پیشرفت بیماری ایفا می کند. با وجود پیشرفت روش های تشخیصی مانند الایزا و وسترن بلات، در برخی موارد نتایج نامشخص گزارش می شود. از سوی دیگر، اندازه گیری بار ویروسی در پیش آگهی بیماری اهمیت دارد. در این مطالعه، با استفاده از روش TaqMan Real Time PCR، سیستمی حساس برای تعیین پرووایرال لود HTLV-۱ بر اساس ژن HBZ طراحی و راه اندازی شد. مواد و روش ها در این مطالعه تجربی، آغازگرها و پروب برای ناحیه ای از ژن HBZ به طولbp  ۱۰۶ طراحی گردید. سپس DNA ژنومی از سلول های تک هسته ای خون محیطی یا PBMCs استخراج شد. پس از تکثیر ژن HBZ ، محصول PCR در پلاسمیدTOPO TA vector  کلون گردید و از آن به عنوان استاندارد جهت راه اندازی روش TaqMan Real Time PCR استفاده شد.  یافته ها برای رسم منحنی استاندارد، از پلاسمید نوترکیب رقت های لگاریتمی ۱۰۸-۱۰۱× ۱/۲ تهیه گردید. در این آزمایش، شیب خط منحنی استاندارد برابر با ۲/۳- وR۲  برابر با ۰.۹۷ بود که نشان دهنده خطی بودن و کارآیی آزمایش می باشد. نتایج تکرارپذیری واکنش در سطح درون سنجی و بین سنجی (در قالب سه تکرار در هر مرحله کاری) و میانگین ضریب تغییرات CV برای نمونه های استاندارد، به ترتیب کمتر از ۵/۳ % و ۵/۹ % بود. هم چنین کمترین حد تشخیص این آزمایش برابر با Copies/µL ۱/۲× ۱۰۱ بوده که نشان دهنده حساسیت بالای این روش می باشد. نتیجه گیری             استفاده از روش Real Time PCR TaqMan با توجه به حساسیت بالا، آنالیز و کاربرد آسان می تواند روش مناسبی برای تعیین بار پرووایرال ویروس HTLV-۱ باشد و امکان پیش آگهی دقیق تری از بروز بیماری ها به واسطه این ویروس را فراهم کند. کلمات کلیدی: بار ویروسی، Real Time PCR ، HTLV-۱

کلیدواژه ها:

Viral Load ، Real-Time PCR ، HTLV-۱ ، بار ویروسی ، Real Time PCR ، HTLV-۱