تولید مولکول نوترکیب پروتئینHTLV-۱ -پروتئاز متصل به Fcγ۱ از IgG۱ انسانی (HTLV-۱ protease:hFcγ۱) با هدف درمان بیماری های وابسته به HTLV-۱

مقاله پژوهشی مقدمه: شمال شرق ایران به عنوان منطقه ی بومی ویروس HTLV-۱ شناخته شده است. با توجه به افزایش شیوع بیماری های مرتبط با HTLV-۱ در کشور، پیشگیری و دستیابی به درمان موثر ضروری می باشد. هدف از مطالعه ی حاضر، طراحی و تولید HTLV-۱-پروتئاز متصل به قطعه Fcγ۱ از آنتی بادی انسانی در سیستم بیانی مخمر پیکیا پاستوریس و استفاده آن در طراحی مهارکننده ی پروتئاز ویروس در مطالعات آینده می باشد. روش ها: پس از طراحی سازه ژنی HTLV-۱ protease:hFcγ۱، ژن بهینه شده آن در محل جایگاه های آنزیمی XhoI و NotI  و کتور بیانی pPICZαA وارد شد. ابتدا پلاسمید نوترکیب با روش کلرید کلسیم به باکتری E. coli TOP۱۰F' و سپس با روش الکتروپوریشن به پیکیا پاستوریس GS۱۱۵ الحاق شد. سویه های حاوی ژن نوترکیب بر روی محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک زئوسین انتخاب و رشد داده شدند. در نهایت، به منظور تایید بیان پروتئین نوترکیب، SDS-PAGE و وسترن بلات انجام شد. یافته ها: در مطالعه ی حاضر؛ طراحی، کلونینگ و بیان پروتئین نوترکیب HTLV-۱ protease:hFcγ۱ با استفاده از دو عنصر HTLV-۱-پروتئاز و مولکول hFcγ۱ انسانی در سیستم بیانی پیکیا پاستوریس انجام گردید. پروتئین نوترکیب HTLV-۱ protease:hFcγ۱ همودایمر بسیار گلیکوزیله با ۳/۸pI:  و kDa۵۰ :Mw است. صحت الحاق سازه ی نوترکیب در وکتور بیانی pPICZαA با استفاده جفت پرایمرAOX۱  و α-factor با تکثیر قطعات به اندازه های  bp۱۳۸۸ و  bp۱۶۸۷ تایید شد. نتیجه گیری: نتایج حاصل از این پژوهش، می تواند راهکاری نوید بخش جهت بکارگیری پروتئین نوترکیب HTLV-۱ protease:hFcγ۱ در طراحی کاندیدای مناسب برای مهارکننده ی پروتئاز ویروس و درمان بیماری های وابسته به HTLV-۱ باشد.

کلیدواژه ها:

HTLV-۱-پروتئاز ، hFcγ۱ ، پیکیا پاستوریس ، پروتئین نوترکیب HTLV-۱ protease:hFcγ۱