بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین

در بررسی حاضر، بخش CDاز پروتئین باکتریورودوپسین (BR) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت BRبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pET۲۱a+ در محل های برش Nde I وHind III کلون شده و تحت کنترل پیش بر T۷ با موفقیت بیان شد. پروتئین بیان شده با SDS PAGE تجزیه شد. اثر دما (A)، زمان القا (B)و زمان فرایند پس از القا (C) روی بازده ی میزان بیان پروتئین ( میزان فراورده بر واحد جرم خشک سلول) با استفاده از تجزیه های جدول Yates غربال گری شد. سه عامل A ، B و C مهم بودند و با روش تاگوچی بهینه شدند. شرایط بهینه عبارتند از: دما oC ۳۷، زمان القا در ۷/۰OD۶۰۰= و زمان فرایند پس از القا ۴ ساعت. همچنین، تولید پیش بینی شده پروتئین در شرایط بهینه، ۵۴ /۲۱%  از کل پروتئین سلولی بود. با استفاده از شرایط بهینه به دست آمده، تاثیر افزودن اسیدهای آمینه روی میزان بیان بخش CD و ترکیب باکتریورودوپسین و رشد باکتری در اشرشیاکولی با استفاده از محیط کشت M۹ مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل جدول Yatesنشان داد که اسیدهای آمینه آلانین، ترئونین و لیوسین دارای اثر بیشتری روی بیان پروتئین بودند و برای افزودن به محیط کشت در فرمانتور در دو سطح گوناگون انتخاب شدند. نتیجه ها نشان دادند که افزودن اسیدهای آمینه باعث افزایش بازده ی تولید پروتئین مورد نظر می   شود، اما تاثیر ناچیزی روی رشد باکتری دارد.

کلیدواژه ها:

اشرشیا کولی ، باکتریورودوپسین ، قطعه C-D ، بهینه سازی ، پروتئین نوترکیب