تعیین الل ژنتیکی (کلاسیک و التور) ژن clxB سویه های Vibrio choleraeO1 جدا شده از بیماران طی سالهای 1388-1383 با استفاده از MAMA-PCR و Sequencing

سابقه و هدف: باکتری ویبریوکلرا O1 عامل بیماری وبا می باشد و از طریق تولید سم کلراتوکسین بیماریزایی می کند. ژن این توکسین (شامل دو زیرواحد A و B) درون ژنوم فاز CTX کد می شود که توالی آن در هر دو بیوتیپ التور و کلاسیک وجود دارد. در این تحقیق با استفاده از تکنیکMAMA-PCR به تعیین الل ژنتیکی (کلاسیک والتور) ژن ctxB در میان سویه های جداشده در طی سالهای 1388-1383 در ایران پرداخته شد. به علاوه با استفاده از تکنیک Sequencing، ناحیه ctxB و به دنبال آن تنوع بیوتیپ فاژ CTX اینتگره شده در ژنوم سویه ها مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: Mismatch amplification mutation assay (MAMA) PCR، برای شناسایی پلیمورفیسم بین ژنهای ctxB دو بیوتیپ کلاسیک و التور به کار گرفته شد. کل ناحیه ژنی ctxB جهت بررسی پلی مورفیسم بین سویه ها مورد توالییابی قرار گرفت. یافته ها: نتایج MAMA-PCR از حضور نوکلئوتید سیتوزین در جایگاه 203 تمام 50 سویه التور خبر داد که نشان دهنده توالی ctxB کلاسیک می باشد. نتایج توالیابی سویه ها ثابت کرد که تمام سویه های التور مورد بررسی، توالی ctxB کلاسیک را دارا می باشند و نوکلئوتید سیتوزین در دو جایگاه 115 و 203 آنها همانند بیوتیپ کلاسیک وجود دارد. نکته جالب توجه اینکه تنها یکی از سویه های سال 1384 با هر دو پرایمر التور و کلاسیک باند 186bp مورد نظ را در MAMA-PCR تشکیل داد. بحثـ نتایج این مطالعه نشان داد که سویه های التور ایران دارای ژن تغییر یافته ای از کلراتوکسین می باند که به نظر می رسد به دلیل آلوده شدن سویه های ویبریوکلرا بیوتیپ التور با فاژ CTX کلاسیک باشد. به علاوه ژنوتیپ جدید یافت شده از سال 1384 نشان می دهد که این سویه احتمالاً توسط دو فاژ CTX التور و کلاسیک آلوده شده است و یا یک فاژ CTX که حاوی چندین نسخه از عنصر ژنتیکی CTX می باشد را دارا می باشد.

کلیدواژه ها:

، Vibrio cholera O1 ، MAMA-PCR ، Sequencing