تولید سلول های بنیادی القاء شده (iPS) از فیبروبلاست های جنینی موش (MEF) با استفاده از سیستم القاء شنده با داکسی سایکلین جهت تولید موش تراریخت

سلولهای پرتوان القایی همانند سلولهای بنیادی توانایی تقسیم نامحدود و تمایز به انواع رده های سلولی را دارند. این سلولها از باز برنامه ریزی ژنومی سلولهای تمایز یافته ای بدست می آیند که ژن های پرتوانی در آنها مجدداً روشن شده است. ما در اینجا سلولهای Ips ای تولید کرده ایم که با سیستم القاء شونده با داکسی سایکلین بیان ژنهای پرتوان خارجی در آن قابل کنترل است. از سلولهای iPS تولید شده برای ایجاد موش تراریخت iPS استفاده خواهد شد. هدف این است که سلولهای جداشده از بافتهای مختلف موش مذکور را پس از قرار دادن در مجاورت داکسی سایکلین به سلولهای iPS تبدیل کرده و در ادامه بازده تولید iPS را برای هر بافت مورد ارزیابی قرار داد. به همین منظور ابتدا لنتی ویروسهای بیان کننده ژنهای القایی Klf4,Sox2,Oct4) OSKM و c-Myc که به صورت پلی سیسترونیک می باشند) و ترانس اکتیویتور M2rtTA در سلولهای HEK 293t تولید شدند. سپس فیبروبلاستهای جنینی موش NMRI با این ویروسها آلوده گردیدند. پس از حدود سه هفته کلونهای بدست آمده به ظرف 24 خانه منتقل شده و به منظور تأئید پرتانی آنها ابتدا اجسام شبه جنینی ساخته و دوهفته پس از تمایز خ ود به خودی، سلولهای ضرباندار مشاهده شد. کلونهای مذکور به موش unde تزریق گردیده تا تشکیل تراتوما در آنها مورد بررسی قرار گیرد. پس از تأئید پرتوانی و کاریوتایپ کلونها سلولهای iPS به بلاستوسیست موش C57 تزریق خواهد شد تا موش کایمر و در نهایت موش تراریخت تولید گردد. نتایج این تحقیق می تواند در بررسی بازده هر بافت در تولید iPS مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

سلولهای بنیادی القاء شده ، م وش تراریخت ، القاء شونده