شناسایی آپتامر DNAای با تمایل بالا علیه آنتی ژن سطحی هپاتیت B با روش تکامل سیستماتیک لیگاند از طریق غنی سازی نمایی

اهداف: هپاتیت B عفونت ویروسی است که می تواند منجر به مشکلات جدی کبدی شود. برای تولید واکسن هپاتیت B از آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B (HBsAg) که به صورت نوترکیب تولید می شود، استفاده می شود. هدف پژوهش حاضر شناسایی آپتامر DNAای با تمایل بالا علیه آنتی ژن سطحی هپاتیت B با روش تکامل سیستماتیک لیگاند با استفاده از غنی سازی نمایی بود. مواد و روش ها: در پژوهش تجربی حاضر با استفاده از روش تکامل سیستماتیک لیگاند از طریق غنی سازی نمایی (​SELEX( قطعه DNAای با قدرت اتصال بالا علیه HBsAg، جداسازی و توالی یابی شد. تمایل این توالی نوکلئوتیدی تک رشته ای با روش فلوریمتری محاسبه شد. اختلاف جذب اولیه و مقدار باقی مانده به عنوان معیاری از میزان توالی های متصل شده با کمک نرم افزار Prism ۵ به روش رگرسیون غیرخطی، محاسبه Binding-saturation و مدل one site-total انجام و میزان میل ترکیبی (Kd) تعیین شد. یافته ها: نتایج بعد از انجام رویه SELEX و ارزیابی توالی تکثیریافته با ژل آگارز، نمونه کنترل مثبت دارای باندی در محدوده ۷۲نوکلئوتید بود که نشان دهنده تکثیر موفق توالی گزینش شده با استفاده از آغازگزهای انتخابی بود. میل ترکیبی محاسبه شده ۸۱/۵۳نانومولار بود. طی مراحل همسانه سازی از روی کلنی های موجود واکنش PCR با آغازگرهای اختصاصی آپتامر، حضور قطعه آپتامر در باکتری اشریشیا کلی تایید شد. آپتامر گزارش شده دارای ساختار ثانویه پایدار با داشتن انرژی آزاد GΔ کمتر از ۹/۶-کیلوژول و Tm بالاتر از C°۴۵  بود. نتیجه گیری: آپتامر DNAای گزینش شده دارای قدرت اتصال بالا به پروتئین هدف (HbsAg) است و می تواند به عنوان جایگزینی برای پادتن ها، در ستون های کروماتوگرافی تمایلی تخلیص HBsAg مورد توجه قرار بگیرد.

کلیدواژه ها:

Hepatitis B Surface Antigen ، SELEX ، DNA Aptamer ، Affinity Ligand ، آنتی ژن سحطی هپاتیت B ، غنی سازی نمایی ، آپتامر DNAای ، لیگاند تمایلی