بیان نوترکیب بخش C-ترمینال پروتئین Rif۱ و محلول سازی آن با سارکوزیل

ژنوم یوکاریوتی حاوی چندین محل شروع همانندسازی می باشد. بررسی ها نشان می دهد که روند و ترتیب فعال شدن این منشاها با نظم خاصی صورت می گیرد که این فرآیند منظم را اصطلاحا زمانبندی همانندسازی (Replication timing) می-گویند. مطالعات اخیر نشان می دهد که فاکتورهای زیادی در تنظیم زمانبندی فرآیند همانندسازی نقش دارند. یکی از مهمترین این فاکتورها پروتئین متصل شونده به Rap۱ (Rif۱)، می باشد که نقش اساسی را در تنظیم برنامه زمانبندی همانندسازی در مخمر و یوکاریوت های پیشرفته تر ایفا می کند. قسمت عمده ساختار این پروتئین به صورت نامنظم بوده و این ویژگی ها مانع از بیان Rif۱ به صورت پایدار شده و مطالعه بر روی آن را دشوار می کند. هدف از مطالعه کنونی بیان نوترکیب دمین C-ترمینال پروتئین Rif۱ موشی (muRif۱-CTD) به صورت محلول می باشد. بدین منظور ژن muRif۱-CTD از سازه یوکاریوتی حاوی ژن کامل Rif۱ به کمک PCR استخراج و در وکتور بیانی pPAL۷ که حاوی برچسب Profinity eXact بود، قرار گرفت. محلول سازی پروتئین با استفاده از دترجنت های مختلف و در مرحله بعد حذف دترجنت با استفاده از دیالیز صورت پذیرفت. به منظور اطمینان از اینکه پروتئین محلول شده دارای فعالیت است آنالیز برهمکنش پروتئین Rif۱ با ساختار G۴ (که قبلا در رابطه با اتصال به Rif۱ معرفی شده بود) با روش ژل شیفت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این بررسی نشان داد که استفاده از دترجنت می تواند برای محلول سازی پروتئین Rif۱ بدون اثرگذاری بر مراحل خالص سازی آن مورد استفاده قرار گیرد. لیکن در مورد این پروتئین در صورت فقدان کامل دترجنت، این پروتئین به صورت محلول نخواهد بود.

کلیدواژه ها:

Rif۱ protein ، sarcosyl ، solubilization ، replication timing ، expression in prokaryotic systems ، پروتئین Rif۱ ، سارکوزیل ، محلول سازی ، زمانبندی همانندسازی ، بیان در سیستم های پروکاریوتی