تشخیص نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ B به روش ساندویچ الایزا

زمینه و هدف: سموم بوتولینوم (BoNTs) جزء کشنده ترین ترکیباتی هستند که تاکنون شناخته شده و عامل بیماری بوتولیسم می باشند. در حال حاضر، تشخیصBoNT در غذا به استفاده از سنجش زیستی روی موش آزمایشگاهی است که یک روش بسیار حساس (محدوده تشخیص pg mL-۱ ۷ تا ۲۰)  اما زمان بر می باشد. این روش سریع، اختصاصی و می تواند حساسیتی معادل آزمایش روی موش آزمایشگاهی دارد. هدف از این تحقیق استفاده از روش  ساندویچ الایزا جهت شناساییBoNT/B بود. مواد و روش ها: پروتئین نوترکیب ۳۷۰ اسید آمینه ای از انتهای کربوکسیل بخش اتصال دهنده سم BoNT/B با وزن مولکولی ۴۵ کیلودالتون به عنوان آنتی ژن بیان و  به روش کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA خالص سازی شد. آنتی بادی IgG از سرم موشی و خرگوشی با روش کروماتوگرافی تمایلی رزین پروتئین G جداسازی و به روش SDS-PAGE و آزمون الایزا ، تائیدشد. حساسیت و اختصاصیت روش طراحی شده جهت تشخیص آنتی ژن نوترکیب BoNT/B-HcC  و توکسوئید بوتولینوم تایپ B ارزیابی شد. نتایج: غلظت آنتیبادی  موشی و خرگوشی تخلیص شده به ترتیب ۳ و ۵/۴ میلی گرم از هر میلی لیتر سرم بود. حداقل غلظت پروتئین قابل شناسایی به روش الایزا غیر مستقیم با آنتی بادی تخلیص شده موشی و خرگوشی ۴۷۵ و ۱۱۸ پیکوگرم تعیین شد. با بهینه سازی روش ساندیچ الایزا حداقل۳۰ نانوگرم از آنتی ژن نوترکیبBoNT/B-HcC  و ۱۴۶ پیکوگرم ازBoNT/B با اختصاصیت بالا شناسایی شد. نتیجه گیری: روش ساندویچ الایزای طراحی شده می تواند برای شناسایی دقیق و حساس سم کلستردیوم بوتولینوم تیپ B مورد استفاده قرار گیرد. لازم است در آینده کارآیی این روش برای تشخیص سم بوتولینوم در نمونههای محیطی و غذایی ارزیابی گردد.

کلیدواژه ها:

Sandwich ELISA ، antibodie ، toxin botulinum type B ، Clostridium botulinum ، ساندویچ الایزا ، نوروتوکسین بوتولینوم تایپ B ، کلستردیوم بوتولینوم ، آنتی بادی