روش سریع با کارایی بالا برای تراریخته نمودن گیاه یونجه به منظور تظاهر ژن BANYULS (BAN)

پروآنتوسیانیدین ها (CTs:Condensed Tannins)، الیگومرهای فلاونوئیدی می باشند که تعدادی از آنها اثرات مفیدی روی سلامت حیوان و انسان دارند. توانایی پروآنتوسیانیدین ها در تشکیل کمپلکس با پروتئین ها سبب شده که تاثیر زیادی بر ارگانیسم های تجزیه کننده پروتئین و در نهایت کاهش خطر نفخ در حیوانات داشته باشند. آنتوسیانین ها نیزفلاونوئیدهایی هستند که در ایجاد رنگ قرمز، بنفش یا آبی در بذرها و گلها شرکت دارند. ژن BAN حاصل از گیاه Arabidopsis thaliana رمزگردان آنتوسیانیدین ردوکتاز (ANR) می باشد. این آنزیم آنتوسیانیدین ها را به ۲,۳-cis-flavan-۳-ols( (+)-catechin ) که به عنوان واحد شروع کننده در تشکیل CT شناخته می شوند تبدیل می کند. انتقال این ژن به گیاه یونجه، به منظور القاء تولید CT در شاخ و برگ آن جهت استفاده بهینه از پروتئین های گیاه و کاهش خطر نفخ درحیوانات انجام شد. عمل تراریزش ریز نمونه های برگی حاصل از دو لاین یونجه چند ساله با نامهای Rgsy۲۷ و ‍‍‍P۱ که در حالت عادی دارای مقادیر ناچیزCT در شاخ و برگ می باشند توسط دو نژاد مختلف باکتری (LBA ۴۴۰۴ , EHA ۱۰۵) Agrobacterium tumefaciens، حامل پلاسمید pBI۱۲۱. BAN (ناقل دوتایی شامل ژن BAN) صورت گرفت. از ریز نمونه های برگی حاصل از لاین Rgsy۲۷ بیش از ۹۰ درصد تولید کالوسهای پیش جنین زا و از ریز نمونه های برگی حاصل از لاین P۱ حدود ۳۰ درصد تولیدکالوسهای پیش جنین زا تولید شد. در هردو لاین بیش از ۶۵ درصد جنین های باززایی شده در مدت ۲ ماه به گیاه کامل تبدیل شدند. کارایی تراریزش لاین هایRgsy ۲۷ و P۱ بستگی به نوع نژادهای Agrobacterium tumefaciens مورد استفاده داشت، به نحوی که لاین های تراریخته توسط ژن BAN با نژاد آگروباکتریوم LBA ۴۴۰۴ بهترین واکنش را نسبت به تولید گیاهان تراریخته نسبت به نژاد EHA ۱۰۵ نشان دادند. تظاهر اکتوپیک ژن BAN در شاخ و برگ گیاه یونجه تراریخته باعث القاء تجمع CT شد که به راحتی از طریق بررسی شیمی بافتی قابل تشخیص بود. عدم فعالیت ژن BAN باعث افزایش مقدار رنگدانه قرمز شد. بنابراین این ژن به عنوان تنظیم کننده منفی در تولید رنگدانه ها می باشد. درصد CT در ماده خشک گیاهان تراریخته لاین های Rgsy۲۷ و P۱ به ترتیب ۴۷۴/۰ و ۶۰۰/۰ در مقایسه با ۲۵۹/۰ و ۴۰۸/۰ در گیاهان کنترل بود.

کلیدواژه ها:

آگروباکتریوم تومفسینس ، آرابیدوپسیس تالیانا ، باززایی ، تراریزش ، پروآنتوسیانیدین ، ژن BAN و یونجه