مقایسه آنزیم پروتئاز باکتری سودوموناس خالص شده از زخم و خاک آلوده به نفت

،Pseudomonase aeruginosa یک باسیل گرم منفی,هوازی اختیاری و متحرک است . این باکتری به عنوان مهمترین پاتوژن گروه سودوموناس ها مطرح است همچنین دومین عامل عفونت های سوختگی و سومین عامل شیوع عفونتهای بیمارستانی است . این باکتری قادر به تولید آنزیم های خارج سلولی متعدد از جمله پروتئاز می باشد و تاکنونمطالعات کمی در رابطه با آنزیم این گونه در سراسر جهان گزارش شده است ولی می توان امروزه با روش های جدیدو نوینی آن را جداسازی کرد و به بررسی در مورد آن پرداخت .آنزیم پروتئاز یکی از آنزیم های محلول در آب است کهقادر به هیدرولیز پیوند پپتیدی موجود در در سوبسترا های پروتیینی است . بسیاری از ارگانیسم ها قادر به ترشح اینآنزیم هستند اما پروتئاز های باکتریایی به دلیل اینکه در حلال های آبی پایدارتر هستند اهمیت بیش تری دارند . از اینرو در بسیاری از صنایع از جمله صنایع غذایی و داروسازی و چرم سازی و .. از پروتئاز های باکتریایی استفاده می شود .در این مطالعه به مقایسه خواص فیزیکی و شیمیایی آنزیم پروتئاز در باکتریaeruginosa pseudomonase جداشده از زخم و خاک آلوده به نفت پرداخته شده است . به این منظور از p. aeruginosaکه قبال از خاک آلوده به نفتجدا شده بود و ازp. aeruginosaجدا شده از زخم بیماران بیمارستانی استفاده شد تا اثر تغییرات زمان,PH,غلظت نمک,دترجنت,دما بر روی فعالیت آنزیم پروتئاز بررسی شود . در مطالعه حاضر برای مقایسه تفاوت ساختار ووزن مولکولی آنزیم ها و خالص سازی نسبی به وسیله روش های رسوب و ته نشینی با استفاده از TCA ۱۵% انجام شدو به وسیله روش الکتروفورز عمودیSDS – PAGEمورد بررسی قرار گرفتند . میزان اسید آمینه با استفاده از معرففولن مشخص شد . نتایج حاصل از این پژوهش نشان داد که تفاوت هایی در فعالیت آنزیم پروتئاز در اثر عوامل محیطیحاصل می شود . به طوری که زمان بیش ترین تاثیر را روی آنزیم پروتئاز جدا شده از از زخم نسبت به سویه جدا شده ازنفت دارد . و اینکه آنزیم پروتئاز در سویه جدا شده از زخم درPH:۷و سویه خاک آلوده به نفت درPH:۱۰بیشترینفعالیت آنزیم را نشان می دهد و اثرPHروی آنزیم پروتئاز هردو سویه از دو نمونه متفاوت مثبت و یکسان بوده است .تاثیر قدرت یونی ( نمکی ) بر فعالیت آنزیم نشان داد که پروتئاز در سویه جدا شده از زخم در غلظت۰/۵ مولارNaclوپروتئاز خاک آلوده به نفت در غلظت۱مولار بیش ترین فعالیت دارد و درکل اثر غلظت نمک روی آنزیم پروتئاز نمونهزخم بیش تر از نمونه خاک آلوده به نفت می باشد . تاثیر غلظت های مختلفTriton X-۱۰۰نشان داد که بیشترین فعالیت آنزیم در غلظت۷۵ماکرولیتر (۰/۰۷۵میلی لیتر ) برای سویه زخم و بیش ترین فعالیت در غلظت۵۰ماکرولیتر (۰/۰۵میلی لیتر ) برای سویه خاک آلوده به نفت به ثبت رسید است . و در نهایت دمای صفر یا۲۵درجه ودمای۷۰درجه به ترتیب بیش ترین میزان فعالیت آنزیم پروتئاز را در سویه های زخم و خاک آلوده به نفت دیده شد .و اثر هردو عامل دما و دترجنت روی نمونه نفت بیش تر از زخم بوده و دو سویه از لحاظ وزن مولکولی یکسان هستند ووزن برای هر دو نمونه حدود۱۳کیلو دالتون تخمین زده شد.

کلیدواژه ها:

پروتئاز ، سودوموناس ، زخم ، خاک آلوده به نفت