تهیه پپتیدهای نوترکیب توکسین های باکتریای جهت جایگزینی آنتی ژن های واکسنی

صنعت تولید واکسن بدلیل هزینه بالا در پی استفاده از روشهای جدید جهت افزایش کارائی و کاهش هزینه تولید واکسن میباشد. از طرفی عمده واکسنها ی مورد استفاده دارای بخشهای آنتیژنی غیر ضروری میباشند که حجم زیادی از فعالیت سیستم ایمنی را به خود مشغول مینمایند و موجب افزایش زمان ایمنیزایی و هزینههای تولید میشوند. لذا تهیه آنتیژنهای ساده با وزن ملکولی پائین و توان آنتیژنی مناسب که قادر به جایگزینی آنتی ژن طبیعی و بدون آنتی ژنهای اضافی باشد از شرایط مطلوبی برخوردار میباشند. در این پروژه توکسینهای باکتریای (توکسین اپسیلون و توکسین بتا باکتری کلستریدیوم پرفرنژنس) مورد ارزیابی ساختمانی قرار داده شد. این توکسینها از نظر توالی ژنتیکی ، پروتئینی و همچنین ساختمان دوم پروتئنی با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورمانتیک آنالیز گردیدند. مناطق معینی از این توکسینها که دارای بیشترین اپیتوپ و قابلیت تهیه قطعات نوترکیب میباشند, با استفاده از روشهای ملکولی شامل تهیه قطعات DNA با استفاده از PCR و انتقال به وکتور PTZ57 با روش T/A کلونینگ تهیه گردید. وکتورها به به میزبان مناسب انتقال و پس از تایید,جهت بیان قطعات به وکتور بیانی PET 21 در باکتری BL21 انتقال داده شد. این قطعات بصورت جداگانه در محیط محرک بیانی تولید و با استفاده از آنتیبادی مناسب ( آنتی بادی تهیه شده بر علیه توکسین طبیعی) مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج برسی نشان داد که دو قطعه تهیه شده دارای توان آنتیژنی مناسبی بوده و میتوانند در صورت اتصال به یکدیگر بصورت fusion protein در ایجاد ایمنی مشترک از دو توکسین در حیوان مورد استفاده قرار گیرند. حذف موانع ساختمانی در پروتئین توکسین جهت بالا بردن آنتی ژنسیته میتواند راه کار مناسبی برای افزایش کارائی واکسنها باشد . پروتئینهای ترکیب شده میتوانند در تشخیص و درمان توکسینهای باکتریایی میتوانند در پدافند غیرعامل مورد استفاده قرار گیرند.

کلیدواژه ها:

کلستریدیوم پرفرنژنسپروتئین های ترکیبی ، واکسن های گیاهی ، توکسین های باکتریائ. ی