تولید و ارزیابی آنزیم اندولایزین موثر بر پروتئوس ولگاریس

یافتن ترکیبات ضد میکروبی جدید به عنوان جایگزین آنتی بیوتیکها حائز اهمیت است. یکی از این ترکیبات اندولایزین ها هستند. اندولایزین ها در انتهای چرخه لیتیک تولید و توانایی تخریب لایه پپتیدوگلیکان باکتری ها را دارند. در این مطالعه از آنزیم اندولایزین بدست آمده از باکتریوفاژهای موثر بر باکتری سودوموناس آئروجینوزا استفاده شد. برای تولید آنزیم تعداد ۳/۵×۱۰۱۱ PFU/ml باکتریوفاژ به ۱۰۰ میلی لیتر از کشت سودوموناس آئروجینوزا اضافه و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت ۱۲ تا ۱۶ ساعت گرماگذاری گردید. از کشت سودوموناس آئروجینوزا بدون افزودن باکتریوفاژ به عنوان کنترل منفی استفاده شد. در ادامه سوسپانسیون سانتریفیوژ و مایع رویی آن فیلتر و اندولایزین با استفاده از ایزوپروپانول سرد تغلیظ گردید. وجود اندولایزین جذب نوری آنزیم در طول موج ۲۸۰ نانومتر اندازهگیری شد. سپس تاثیر آنزیم قبل و بعد از تغلیظ و در حالت خشک شده در خلا علیه پروتئوس ولگاریس مورد ارزیابی قرار گرفت. جذب نوری آنزیم و کنترل به ترتیب ۰/۱۸ و ۰/۰۵ بود. در واکنش آنزیمی، آنزیم با غلظت ۰/۳ میکروگرم بر میلی لیتر توانست در مدت یک ساعت کدورت باکتری را از ۰/۴ به ۰/۳ کاهش دهد. آنزیم قبل از تغلیظ هاله ای به قطر ۹ و بعد از تغلیظ هالهای به قطر ۵ میلیمتر بر روی پلیت باکتری مرده پروتئوس ولگاریس ایجاد کرد. اندازه تقریبی اندولایزین با استفاده از الکتروفرز عمودی و مقایسه کنترل و آنزیم ۳۵ کیلو دالتون تخمین زده شد.

کلیدواژه ها:

اندولایزین ، پروتئوس ولگاریس ، فاژ درمانی ، سودوموناس آئروجینوزا