بارگذاری پروتئین CfaB از باکتری اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک در نانورذات کیتوزان و ارزیابی ایمنی زائی آن

مقدمه:سویه های بیماریزای اشرشیاکلی از عوامل شایع اسهال می باشد. ظهور سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک یکی از بزرگترین تهدیدات سلامت جهانی است. بر این اساس تولید یک واکسن ایمنوژن موثر علیه باکتری های بیماری زا ضروری است. بارگذاری ایمنوژن های نوترکیب در نانو حاملها، سبب ایمنی زایی موثر ایمنوژنها میشود. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زائی پروتئین CfaB بارگذاری شده در نانوذرات کیتوزان و ارزیابی پاسخ ایمنی علیه عفونت EHEC بود.موادوروشها: بیان پروتئین نوترکیب CfaB، در میزبان بیانی درE.coli BL۲۱ DE۳ با استفاده از IPTG القا شد. پروتئین نوترکیب بوسیله ستون نیکل تخلیص و از روش وسترن بلات برای ارزیابی پروتئین نوترکیب استفاده شد. نانوذرات کیتوسانی به روش ژلاسیون یونی و از طریق میانکنش کیتوسان با اتصال دهنده تری پلی فسفات (TPP) تهیه شد. نانوژل ها با پروتئین نوترکیب بارگذاری و خصوصیات ساختاری آن ها با SEMو DLS بررسی شد.ایمنی زایی زیرپوستی موش ها انجام و تیترآنتی بادی توسط ELISA تعیین شد. و در نهایت ممانعت سرم از اتصال باکتری ETECبه سلول Caco۲بررسی شد.یافته ها و نتیجه گیری: آنالیزSDS-PAGE بیان پروتئین با وزن۱۹کیلو دالتون را نشان داد. پروتئین نوترکیب توسط وسترن بلات تایید شد. ظرفیت بارگذاری پروتئین در نانوذرات کیتوزان، ۸۵ درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات ۲۳۰ نانومتر بود. تیتر پایانی الیزا برای پاسخ هومورال به پروتئین بارگذاری شده ۲۵۶۰۰ بود. سرم موش های ایمن اتصال باکتری ETEC به سلول های Caco۲را %۶۰ کاهش داد:.نتایج مطالعه نشان داد که بارگذاری پروتئین نوترکیب پروتئین نوترکیب CfaB در نانوذرات کیتوزان پاسخ ایمنی هومورال علیه باکتری ETEC را تحریک می کند

کلیدواژه ها:

کیتوزان ، نانوذرات ، اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک ، CfaB ، ایمنی زائی