بیان و بارگذاری پروتئین کایمر نوترکیب از باکتری شیگلا در نانوذره PLGA و تولید آنتی بادی علیه آن

مقدمه: باکتریهای جنس شیگلا از خانواده انتروباکتریاسه بوده و برخی از گونه های آن مانند شیگلا دیسانتری باعث بروز بیماری شیگلوز می شوند. فاکتورهای تهاجمی،پروتئینهای سیستم ترشحی نوع III و توکسین مهمترین عوامل بیماریزایی باکتری میباشند. مقابله با این باکتری و درمان آسیبهای ناشی از آن از طریق روشهای مرسوم همچون آنتی بیوتیکها منجر به مقاوم شدن و همهگیریهای آن میگردد. از سوی دیگر امروزه استفاده از سامانه های کنترلی انتقال و رهایش دارو بیش از پیش مورد توجه قرار گرفته و در این میان نانوذرات به دلیل ویژگیهای مطلوب نقش پررنگی در این حوزه پیدا کرده اند.روش کار: باکتری E.coli BL۲۱(DE۳) که دارای سازه ژنی کایمر در بردارنده ایمونوژن های Ipad-StxB-IpaB-VirG از جنس شیگلا در وکتور pET۳۲a(+) کلون شده و جهت تولید پروتئین نوترکیب مورد استفاده قرار گرفت. باکتری در محیط کشت LB به صورت ۵ ساعته کشت داده و پس از رسیدن OD به ۰.۶ به آن IPTG القاء شده تا پروتئین کایمر بیان شود و سپس سانتریفیوژ می شود و رسوب باکتری بهکمک اوره ۸ مولار لیز شده و محلول رویی شفاف حاصل از آن برای تخلیص پروتئین کایمر در ستون Ni-NTA به دست میآید. حضور پروتئین به کمک SDS-PAGE و آنالیز وسترن بلات تایید شد. و پس از تخلیص به کمک ستون کروماتوگرافی تمایلی در نانوذره بارگذاری گردید. پس از بررسی خواص فیزیک و شیمیایی پروتئین بارگذاری شده، و تزریق آن به حیوان آزمایشگاهی به صورت آنتی ژن تنها، آنتی ژن مخلوط با ادجونت فروند و بارگذاری شده در در نانوذره به شکل زیر جلدی انجام شد. پس از بررسی خواص فیزیکی و شیمیایی پروتئین بارگذاری شده ، تزریق آنتی ژن به حیوان آزمایشگاهی، بررسی تیتر آنتی بادی تولیدی و توانایی آندر خنثی سازی باکتری ؛ حیوانات ایمن شده مورد چالش قرار گرفتند بحث و نتیجه گیری: اندازه نانوذرات واجد پروتئین بارگذاری شده تقریبا میانگین ۱۹۵ نانومتر تعیین گردید. راندمان و بازده بارگذاری نانوذرات به ترتیب حدودا ۸۵ درصد محاسبه شد. و میزان زنده مانی موشهای ایمن در چالش باکتری شیگلا در مقایسه با نمونه کنترل افزایش ۵۰ درصدی نشان داد. از این رو پروتئین نوترکیب BDSV، با هدف قرار دادن شاخصه های اصلی تهاجم و اتصال باکتری شیگلا می تواند به عنوان کاندید ایمونوژن مناسب مطرح گردد. مقایسه تیتر آنتی بادی گروه های مختلف حاکی از آن بود که بهترین پاسخ ایمنی در گروه آنتی ژن بارگذاری شده در نانوذره PLGA بدست آمده است.

کلیدواژه ها:

شیگلا ، پروتئین کایمر ، نانوذره PLGA ، کاندید واکسن ، ایمونوژن