بررسی نقش پلی مورفیسم های ژن ACE۱ (rs۴۶۴۶۹۹۴, rs۱۷۹۹۷۵۲)در بیماران مبتلا به سل فعال مراجعه کننده به بیمارستان دکتر مسیح دانشوری

آنزیم مبدل آنژیوتانسین (ACE) I یک هیدرولاز پپتیدیل دی پپتیدی است که ۲ اسید آمینه را در انتهای کربوکسیل (His-Leu) از آنژیوتانسین I که یک دکاپپتید است جدا می کند و آنژیوتانسین II)، یک اکتاپپتید) تولید می کند. با توجه به اهمیت ACE و مهارکننده های آن در پاتوژنز و درمان بیماری های مختلف، اندازه گیری آن علاوه بر ارزش علمی از اهمیت بالینی و تجاری نیز برخوردار است. هدف از این مطالعه بررسی نقش پلی مورفیسم های ژن ACE۱ (rs۴۶۴۶۹۹۴, rs۱۷۹۹۷۵۲) در بیماران مبتلا به سل فعال مراجعه کننده به بیمارستان دکتر مسیح دانشوری می باشد. بر اساس این مقاله، در مطالعه حاضر، ACE به عنوان منبع غنی از ACE در ۳ مرحله خالص سازی شد. برای استخراج ACE، پس از همگن سازی، از مواد دترجنت غیریونی Nonidet-P۴۰ استفاده شد، سپس محلول استخراج شده از ماده دترجنت تحت رسوب با سولفات آمونیوم با غلظت های اشباع ۶۰ و ۸۰ درصد قرار گرفت. در مرحله بعد، مایع رویی به دست آمده از طریق تبادل یونی با Q-Sepharose HP کروماتوگرافی شد، سپس نمونه هایی که حداکثر فعالیت آنزیمی خاص داشتند، تحت کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون توسط Sepharryl HR S۲۰۰ قرار گرفتند. پس از این مرحله، خلوص آنزیم توسط SDS-PAGE و PAGE تایید شد و وزن مولکولی آن ۱۸۵ کیلودالتون تعیین شد. فعالیت اختصاصی نهایی به دست آمده برای ACE ۳۹.۱ واحد در میلی گرم بود که پس از ۷۵۵ بار خالص سازی به دست آمد و راندمان نهایی فرآیند خالص سازی ۱,۵ درصد بود. پس از خالص سازی آنزیم، Km آن (ثابت (michaelis برای سوبسترا HHL ۲.۱۷ میلی مول محاسبه شد. مهارکننده رقابتی کاپتوپریل می تواندتقریبا۰ به طور کامل ACE را در غلظت های ۰,۱ تا ۰,۰۰۱ میلی مولار مهار کند.pH بهینه برای ACE ۸.۳ محاسبه شد. همچنین بررسی اثر تغییرات دما کاهش معنی داری را در فعالیت آنزیم در دماهای بالاتر از ۳۷ درجه سانتیگراد نشان داد. کاهش مراحل تصفیه و زمان مورد نیاز برای آن و همچنین بازدهی مناسب به دست آمده، نتیجه استفاده از رزین های با قدرت جداسازی بهتر و استفاده از سیستمFPLC (Fast Protein Liquid Chromatography) بوده است.

کلیدواژه ها:

ACE۱ ، پلی مورفیسم ژن ، سل فعال