تشخیص آلودگی باکتری گرم منفی با استفاده از روش مولکولی((LAMP

مقدمه: تشخیص و شناسایی سریع آلودگی چه بهمنظور پیشگیری از بیماری، چه برای سرعت بخشیدن به روند درمانآن، از اهمیت زیادی برخوردار است. تاکنون روش های مختلفی برای تشخیص آلودگی های باکتریایی شناسایی و استفاده شده است. روش های فنوتیپی (شناسایی از طریق ویژگی های مورفولوژی و بیوشیمیایی)، ایمونولوژیکی (الایزا) و مولکلولی (انواع (PCR که امروزه بدلیل حساسیت بالاتر، از روش های مولکولی بیشتر استفاده میشود. اما روش های مذکور معایبی همچون: زمانبر بودن، پیچیدگی تست و نیاز به متخصص و دستگاه های گران قیمت یا در برخی موارد حساسیت و کارایی پایین دارا هستند. به همین دلایل نیاز به روش تشخیصی سریع و کارآمد وجود داشت. در این مطالعه به بررسی روش LAMP (تکثیر همدمای وابسته به حلقه) در تشخیص آلودگی سالمونلایی پرداخته شد.مواد و روش ها: ژن invA بعنوان ژن شاخص جهت تشخیص جنس سالمونلا انتخاب گردید. باکتری سالمونلا انتریکا بعنوان هدف و باکتری های اشرشیاکلی، کلبسیلا پنومونیه و آسینتوباکتربومانی بهعنوان کنترل منفی و بهمنظور تعیین حساسیت واکنش، یک سریال رقت از نمونهی سالمونلا تهیه و مورد آزمون با روش LAMP قرار گرفتند.یافته ها: روش LAMP توانست در یک حمام آب گرم به عنوان محیط انجام واکنش، در مدت ۷۰ دقیقه، تا مقدار ۲.۱۹ ng/µl از DNA سالمونلا را تکثیر کند و طبق انتظار، قادر به تکثیر DNA دیگر باکتری ها نبود. نتایج از طریق مشاهدهی کدورت تشکیل شده پس از واکنش و سپس استفاده از رنگ DNA Safe Stain و مشاهده زیر نور UV استفاده شد و در انتها نتایج با روش ژل الکتروفورز تایید شدند.نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد، روش LAMP میتواند به عنوان یک روش کارآمد، آلودگی سالمونلایی را بدون نیاز به تجهیزات گران قیمت، در مدت زمان کوتاه، با حسیاسیت زیاد؛ ایضا با روش مشاهدهی نتایج ساده، تشخیص دهد.

کلیدواژه ها:

باکتری ، سالمونلا ، LAMP ، تکثیر همدما وابسته به حلقه