تثبیت آنزیم اوره آز روی نانو بیوفیبریل های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی

آنزیم اوره­آز (EC.۳.۵.۱.۵) از دسته هیدرولاز­ها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز می­کند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیت­های تشخیص اوره، صنایع نوشابه­سازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشته­های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی به­عنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اوره­آز استفاده شد. تولید نانو رشته های آمیلوئیدی با سه تکنیک طیف­سنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینه­سازی شده و رشته های حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تایید قرار گرفتند. سپس آنزیم اوره­آز با استفاده از مولکول­های گلوتارآلدهید و با ایجاد پل­های عرضی روی رشته­های آمیلوئیدی تثبیت شده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشته­های آمیلوئیدی پس از ۴۸ ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت ۱۰ میلی­گرم بر میلی­لیتر و دمای ۷۰ درجه سانتی گراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر ۴ به­دست آمد. آنزیم تثبیت­شده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگه­داری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز Km کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از ۴۰ به ۷۰ درجه سانتی­گراد و pH بهینه نیز از ۶ تا ۷ به ۶ تا ۹ در آنزیم تثبیت­شده بهبود یافت. بنابراین رشته های آمیلوئیدی با داشتن گروه­های شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اوره­آز مناسب بوده­اند. بهبود ویژگی های سینتیکی و پایداری آنزیم اوره­آز در اثر تثبیت بر رشته­های آمیلوئیدی امکان استفاده گسترده­تر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم می­آورد.

کلیدواژه ها:

تثبیت آنزیم ، اوره آز ، رشته های آمیلوئیدی ، آلبومین سرم گاوی