بهینه سازی تخلیص پروتئین لایه S از سویه Deinococcus radiodurans R۱

پروتئین های لایه سطحی Deinococcus radiodurans یکی از بهترین سیستم های خودآرایی در بین پروتئین های دیگر هستند که نقش اساسی در ساخت نانوسیم ها دارند. بنابراین لازم است این پروتئین ها خالص سازی شوند. هدف از این تحقیق بهینه سازی خالص سازی پروتئین لایه سطحی از D. radiodurans با روش سطح پاسخ است. ابتدا سه عامل غلظت SDS، زمان انکوباسیون و درصد جرم در پنج سطح در نظر گرفته شد و ۲۰ اجرا با نرم افزار Design-Expert با روش مرکب مرکزی طراحی شد. هر مرحله شامل کشت میکروب، آماده سازی سلول انبوه، انکوباسیون میکروب در غلظت خاص SDS و زمان و درصد جرم، جداسازی باکتری از مواد شوینده با سانتریفیوژ در g۵۰۰۰، ته نشینی پروتئین های لایه سطحی از محلول شوینده با سانتریفیوژ در g۲۰۰۰۰، تعیین غلظت و خلوص پروتئین به ترتیب با روش برادفورد و SDS-PAGE است. در نهایت داده های به دست آمده مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. تجزیه و تحلیل نتایج نشان داد که در سطح اطمینان ۹۵ درصد، تاثیر فاکتور غلظت ماده شوینده بر درصد پروتئین خالص شده بیشتر از سایر عوامل بود. نتایج بهینه سازی فاکتورها بدین صورت بود: غلظت SDS ۶۴/۵ درصد، درصد جرم ۷/۳۳ درصد و ۳ ساعت زمان انکوباسیون. در شرایط بهینه، غلظت پروتئین و درصد خلوص به ترتیب mg/ml ۰/۵۸۴ و ۴۷/۶۱ درصد به دست آمد.

کلیدواژه ها:

electrophoresis ، detergent ، purification ، response surface ، surface layer protein ، الکتروفورز ، پروتئین لایه سطحی ، تخلیص ، سطح پاسخ ، شوینده