طراحی، ساخت و تایید مولکولی سازه جفتی بیان کننده ژن MaSp۱ و بیان گذرای آن در الیاف پنبه

پنبه L.) Gossypium hirsutum) از محصولات مهم زراعی دنیا است و افزایش کیفیت الیاف آن از اهمیت فراوانی در صنایع نساجی برخوردار است. رشته­ های تار عنکبوت محکم­ترین و کشسان­ترین الیاف شناخته شده در طبیعت است. بدین جهت سازه­ای طراحی شد تا با بیان ویژه پروتئین تار عنکبوت در الیاف پنبه منجر به افزایش کیفیت آن جهت ریسندگی شود. پس از سنتز سازه مورد­نظر که ترکیبی از پروموتر ویژه بیان در فیبر پنبهRD۲۲-like۱ ، توالی کوزاک مانند در گیاهان و توالی مصنوعی بر­اساس ژن  Lh Major ampullate Spidroin۱ (MaSp۱) بود، پلاسمید مورد نظر توسط دو آنزیم EcoRI و NheI برش دوگانه داده شد و پس از استخراج قطعه مورد­نظر بین جایگاه ­های برش EcoRI و NheI دروکتور باینری pCAMBIA۱۳۰۴ همسانه­ سازی شد. پس از تراریختی E.coli DH۵ α توسط این پلاسمید و استخراج آن، پلاسمید جدید pCSP نام­گذاری شد. با واکنش زنجیره­ای پلیمراز توسط پرایمر اختصاصی ژن مورد نظر و ژن مقاومت به هیگرومایسین و همچنین برش آنزیمی دوگانه صحت واکنش اتصال به تایید رسید. پس از تراریختیAgrobacterium tumefaciens LBA۴۴۰۴ توسط pCSP، صحت تراریختی با واکنش زنجیره­ای پلیمراز تایید شد. سپس تخمک پنبه رقم ورامین توسط آن ترایخته شد و با اثبات بیان ژن MaSp۱ در تخمک و الیاف پنبه در محیط در شیشه مشخص ­شد پروموتر GaRDL۱ که متعلق به گونه دیگری از پنبه است به­خوبی توان کنترل بیان ژن مورد نظر در الیاف پنبه را دارد و توالی ژن سنتزی بدون بهینه­سازی کدون در الیاف پنبه قابل بیان می­باشد.

کلیدواژه ها:

spidroin ، ovule ، transformation ، double digestion ، promote ، اسپایدرویین ، تخمک ، تراریختی ، برش دوگانه ، پروموتر