کارآیی ترشح و گاماکربوکسیلاسیون فاکتور IX نوترکیب انسانی در سلول های پایدار دروزوفیلا

چکیده سابقه و هدف فاکتور IX طی بلوغ خود در کبد، نیازمند کربوکسیلاسیون اسیدآمینه های گلوتامیک در ناحیه گلا می باشد که در ترشح و فعالیت آن نقش دارد. با توجه به ناکارآمدی سیستم بیانی پستانداران در ترشح و گاماکربوکسیلاسیون کامل فاکتورهای انعقادی نوترکیب و فعالیت بالاتر آنزیم گاماکربوکسیلاز در سامانه دروزوفیلا (S۲)، مطالعه حاضر با هدف بررسی قابلیت این سامانه در گاماکربوکسیلاسیون و لذا ترشح و فعالیت فاکتور IX انجام شد.   مواد و روش ها در این پژوهش تجربی، به دنبال تراآلایی سلول های S۲ با وکتور pMT-hFIX، برای ارزیابی کمی بیان و فعالیت فاکتور IX از روش الایزا و aPTT و برای بررسی گاماکربوکسیلاسیون فاکتور IX از روش رسوب دهی پروتئین های محیط کشت به وسیله باریوم سیترات استفاده شد. نمونه ها در سه روز متوالی و با سه تکرار و توسط آزمون های واریانت آنوا و دانکن در سطح ۵% بررسی شدند. یافته ها نتایج آزمون انعقاد، ترشح فاکتور IX فعال توسط سلول های S۲ پایدار را نشان داد. هم چنین ارزیابی کمی فاکتور IX در محیط کشت و لیز سلولی با الایزا، کارآیی ۹۴ درصدی ترشح را نشان داد. نتایج الایزا نیز در ارزیابی کمی فاکتور IX رسوب داده شده با باریوم سیترات نشان داد که حدود ۴۵% از فاکتور IX  مترشحه از سلول های S۲، کاملا کربوکسیله اند.  نتیجه گیری فعالیت فاکتور IX و رسوب آن توسط باریوم سیترات موید قابلیت سلول های S۲ برخلاف سایر سلول های حشرات در گاماکربوکسیلاسیون فاکتور IX است. نتایج تحقیق، شواهد متقاعد کننده ای را فراهم می کند که گاما کربوکسیلاز دروزوفیلا، گاماکربوکسیلاسیون لازم که برای ترشح و فعالیت انعقادی فاکتور IX لازم است را انجام می دهد.

کلیدواژه ها:

Key words: Coagulation factor IX ، Hemophilia B ، gamma-glutamyl carboxylase ، GALA peptide ، کلمات کلیدی: فاکتور IX انعقادی ، هموفیلی B ، گاما گلوتامیک کربوکسیلار ، پپتیدگلا