ارزیابی و مقایسه روش های سرولوژیکی ایمونوفلورسانس غیرمستقیم (IFAT) و آگلوتیناسیون مستقیم (DAT) با استفاده از آنتی ژن استاندارد شده در تشخیص لیشمانیوز احشایی

سابقه و هدف: لیشمانیوز احشایی انسانی (HVL) در استان های فارس و اردبیل به صورت آندمیک و در سایر مناطق کشور به شکل تک گیر (Sporadic) گزارش شده است. لیمشانیوز احشایی در ایران از نوع مدیترانه ای و عامل آن لیشمانیا اینفانتوم (L. infantum) و مخزن آن سگ می باشد. این بیماری در ایران بیشتر بچه ها را مبتلا می کند و در صورت عدم تشخیص زود هنگام، عوارض خطرناکی را پدید می آورد.مواد و روش ها: در این مطالعه با استفاده از آنتی ژن استاندارد شده، روش آگلوتیناسیون مستقیم (DAT) با روش ایمونوفلورسانس غیر مستقیم (IFAT)، مورد مقایسه قرار گرفت. آنتی ژن مورد نیاز، از پروماستیگوت های سویه L.infantum (MHO/TN/۸۰/IPTi) در گروه انگل شناسی دانشکده پزشکی تهیه، استاندارد و مورد استفاده قرار گرفت. به همین منظور پروماستیگوت های لیشمانیا در محیط های کشت N.N.N و RPMI۱۶۴۰ به مرحله تولید انبوه رسید. مراحل تهیه آنتی ژن DAT به طور کلی شامل تریپسینه شدن، فیکس با فرمالدیید و رنگ آمیزی با کوماسی بلو (Comassie blue) می باشد. هم چنین آنتی ژن IFAT با استفاده از پروماستیگوت های کشت داده شده در محیط RPMI ۱۶۴۰، پس از مراحل شست و شو و فرمالینه شدن، بر روی لام مخصوص میکروسکپ فلورسانس فیکس و آماده گردید. سپس سرم های تهیه شده (۷۰ نمونه) با دو روش DAT و IFAT مورد آزمایش قرار گرفت.یافته ها: نتایج به دست آمده، در این مطالعه نشان داد که نسبت سرم های مثبت Sero-positive rate (SPR) در روش DAT در ترازهای ۱:۳۲۰۰ و بالاتر، ۹۱.۴ درصد و در روش در ترازهای ۱:۸۰ و بالاتر، ۹۴.۳ درصد می باشد. (GMRT) Geometricmeans of reciprocal titer برای روش DAT برابر ۶۳۰۹ و در روشIFAT برابر ۳۱۶ به دست آمد. استنتاج: با توجه به ترازهای به دست آمده در هر دو روش، تراز ۱:۳۲۰۰ روش DAT ارزشی معادل تراز ۱:۸۰ روش IFAT دارا می باشد. نتایج حاصل از این بررسی نشان داد هر چند که آزمون IFAT جهت تشخیص بیماران مبتلا به کالا آزار از کارایی خوبی برخوردار است، نیاز به یک آزمایشگاه مجهز می باشد؛ در صورتی که روش DAT یک روش ساده، ارزان و قابل اجرا در مناطق روستایی (آندمیک) و جایگزین مطمئن برای روش پر هزینه IFAT می باشد.

کلیدواژه ها:

Visceral leishmaniasis (kala-azar) ، Indirect immunofloresent antibody test (IFAT)- direct agglutination test (DAT) ، آنتی ژن ، لیشمانیوز احشایی ، آگلوتیناسیون مستقیم ، ایمونوفلورسانس غیرمستقیم