بهینه سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین C) در باکتری E.coli سویه BL۲۱

سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین C را جهت دفاع و شکار ترشح می کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین C به اشیرشیاکلی سویه BL۲۱، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتری ها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن FraC به وسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری ها روی محیط حاوی آنتی بیوتیک مناسب (آمپی سیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید GF-۱ صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیم های NcoI وHind ІІІ  و هم چنین کنترل PCR قرار گرفتند. بعد از تایید حضور پلاسمید حاوی ژن FraC در باکتری میزبان، باکتری ها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین FraC توسط IPTG ۱mM در زمان های مختلف و دمای cº۲۰ القا شدند. پس از جمع آوری باکتری های بیان کننده FraC در زمان های مختلف، بیان آن ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید(SDS-PAGE)  مشهود بود. یافته ها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن FraC با موفقیت انتقال یافت. هم چنین نتایج SDS-PAGE نشان داد که FraC در زمان های ۶ و ۸ ساعت با استفاده از IPTG ۱mM در دمای cº۲۰ بیش ترین بیان را دارند. استنتاج: با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تاثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب می تواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتری ها یاری کند.

کلیدواژه ها:

Sea Anemones ، Fragaceatoxin C ، transformation ، expression ، E.coli ، شقایق دریایی ، فراگاسیا توکسین C ، انتقال ، بیان ، اشیرشیاکلی