بیان و خالص سازی پروتئین کایمر نوترکیب (۳M۲e-HA۲) واجد نواحی حفاظت شده هماگلوتینین و پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا در راستای تولید واکسن زیرواحدی جهانی

سابقه و هدف: ویروس آنفلوانزا یکی از مهمترین عوامل عفونی در سراسر جهان است که تغییرات آنتیژنیک آن چالش بزرگی در مسیر تولید واکسن میباشد. در حال حاضر اکثر پژوهشها بر روی توسعه واکسنهای زیرواحدی حاصل از پپتیدهای آنتیژنیک حفاظت شده ویروس متمرکز شده است. زیر واحد کوچک مولکول هماگلوتینین (HA۲) و بخش آمینی خارج سلولی پروتئین کانال یونی (M۲e) با ۲۳ اسید آمینه، در همه ویروسهای آنفلوانزای A انسانی بسیار حفاظت شده هستند و هدف مناسبی برای تولید واکسن آنفلوانزای وسیع الطیف میباشند. مواد و روش ها: در این پژوهش، قطعه ژنی ۳M۲e سنتتیک، بالا دست ژن HA۲ در سازه pET۲۸a-HA۲ پس از هضم آنزیمی با آنزیم BamH۱، کلون شد. سازه واجد کایمر ۳M۲e-HA۲ به باکتری E.coli سویه BL۲۱ منتقل شد و سلولها در محیط مایع LB حاوی کانامایسین (۵۰mg/ml) بعد از القا با ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوزید (IPTG) به صورت کشت شبانه رشد داده شد. بررسی و تایید بیان سازه ۳M۲e-HA۲ به وسیله الکتروفورز روی ژل پلیآکریلآمید PAGE SDS- و وسترن بلات با استفاده از آنتیبادیهای مونوکلونال اختصاصی انجام شد و سپس پروتئین نوترکیب توسط ستون Ni-TED تخلیص گردید. یافته ها: نتایج کلونی PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن ۳M۲e در وکتور pET۲۸a-HA۲ به طور صحیح و در قاب خواندنی دنبال هیستیدینی کلون شده است. استنتاج: شناسایی آنتیبادی علیه اپی توپهای حفاظت شده HA۲ و M۲e، گامی مهم به سوی ساخت واکسن جهانی ویروس آنفلوانزا است، بنابراین سازه  (۳M۲e-HA۲)تهیه شده در این مطالعه میتواند کاندید واکسن زیر واحدی مناسبی برای پیشگیری از این عفونت باشد.

کلیدواژه ها:

Influenza ، M۲e ، Hemagglutinin ، chimer ، subunit vaccine ، ویروس آنفلوانزا ، کایمر ۳M۲e-HA۲ ، واکسن زیر واحدی