ساخت گیرنده کایمریک لنفوسیت T دارای کمک محرک OX۴۰ علیه سلول های سرطان سینه

مقدمه و هدف: گیرنده­های کایمریک سلول­های T روش خوبی برای ایمنوتراپی سرطان فراهم کرده است. در این گیرنده بجای قطعه متغیر گیرنده سلول T از نانوبادی استفاده شده است. نانوبادی یا VHH کوچکترین قطعه آنتی بادی زنجیره سنگین شتری است که قابلیت اتصال به آنتی­ژن دارد و نیز همولوژی بسیاری با VH انسانی داشته، از قدرت ایمنی زایی اندکی بهره مند است. سازه رسپتور کایمریکی که در آزمایشگاه ما ساخته شده دارای VHH-hing-CD۲۸-CD۳ζ است. اگرچه گیرنده­های کایمریکی که از طریق CD۳ζ فعال می­شوند اینترفرون گاما آزاد می­کنند، اما به علت نبود سیگنال­های کمک تحریکی  نمی­توانند به طور کامل فعال شوند. لذا وجود CD۲۸ باعث رهاسازی اینترلوکین ۲ شده و تکثیر تومور را محدود می­کند؛ اما باعث فعال شدن کامل T سل نمی­شود. به منظور بهبود عملکرد گیرنده­های کایمریک، اندودامین­های سه بخشی ساخته شده است که شامل CD۲۸-OX۴۰-CD۳ζ است. به دنبال تحریک سلول­های T کمک محرک OX۴۰ سیگنال­های قوی فعا ل سازی و طولانی مدت برای این سلول­ها ایجادمی­کند که برای حفظ پاسخ ایمنی بسیار مهم است.مواد و روش­ها: در این تحقیق پرایمرهای هم­پوشان که ۶۰% از توالی OX۴۰ را در برداشت سنتز و قطعه CD۲۸-Ox۴۰-CD۳ζ با روش SOE PCR ایجاد شد و سپس این توالی با قطعه  CD۲۸-CD۳ζ در سازه  VHH-hing-CD۲۸-CD۳ζ جایگزین شد. بعد از انتقال این سازه به درون سلول­های Jurkat) T) بیان گیرنده در سطح mRNA و عملکرد آن با روش­های semi-quantitative RT PCR و کیت الایزا سنجش IL-۲ ارزیابی شد.نتایج و نتیجه­گیری:  نتایج حاکی از آن است که عملکرد و بیان سازه دارای OX۴۰ بیشترشده است. با توجه به نتایج ارزیابی IL-۲ و semi-quantitative RT PCR می­توان چنین نتیجه گیری کرد که میزان بیان سازه های pCDNA-۱ hinge CAR-OX۴۰ و pCDNA-۲ hinge CAR-OX۴۰ برابرند اما عملکرد سازه pCDNA-۲ hinge CAR-OX۴۰ بیشتر است.

کلیدواژه ها:

گیرنده سلول T کایمریک ، نانوبادی ، OX۴۰ ، Tلنفوسیت