طراحی ، بیان، خالص سازی و بررسی فعالیت پروتئین فیوژن اندواستاتین -SUMO

آنژیوژنز یا رگزایی رشد عروق خونی از عروق پیشین است که مطالعات در این زمینه در سال های اخیر به شدت رشد کرده است زیرا به گفته ی بنیاد آنژیوژنز، زندگی حداقل ۱ میلیارد نفر در سراسر جهان با درمان آنژیوژنز قابل بهبود است . این فرآیند نقش مهمی را هم در وقایع فیزیولوژیک مانند رشد و نمو، ترمیم زخم و تولید مثل و هم در پیشرفت پدیده های پاتولوژیکی و بروز بیماری های مختلف به خصوص رشد تومور و متاستاز دارد. رگزایی شامل یکسری رویداد است که با ترشح فاکتورهای رگزایی مثل VEGF و اتصال آن به گیرندهاش روی سطح سلولهای اندوتلیال آغاز می شود. اندواستاتین قطعه ی انتهای کربوکسیل کلاژن XVIII، یک مهارکننده درون زاد رگزایی است که رشد طیف وسیعی از تومورها را بدون سمیت و مقاومت دارویی اکتسابی مهار می کند. تحقیقات پیشین نشان داده است ، قطعات کوچکتر مشتق شده از اندواستاتین که هنوز خواص ضد رگزایی خود را حفظ کرده اند، فعالیت ضد تکثیر، ضد مهاجرت و ضد توموری بیشتری را در مقایسه با پروتئین کامل اندواستاتین دارد. در این تحقیق قطعه مهندسی شده ۴۹=۱ اندواستاتین که اثرات بازدارنده ای بر تکثیر، مهاجرت و رگزایی دارد، طراحی و تولید شد و سپس فعالیت آن مورد بررسی قرار گرفت . ژن همجوشی ( SUMO-active site (TEV-Endostatin در وکتور pET-۲۸a(+) کلون شد و به سویه های باکتری E. coli منتقل و بیان شد و با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی و توسط Ni-NTA sepharose خالص سازی صورت گرفت . نتایج اثربخشی این فیوژن پروتئین روی گیرنده های VEGF در شرایط in vitro بر روی رده سلولی اندوتلیال بند ناف انسانی (HUVECs) و رده سلولی سرطان پستان ۴T۱ مورد بررسی قرار گرفت .

کلیدواژه ها:

اندواستاتین ، رگزایی ، تومور ، SUMO