Cloning and expression of Brucella outer membrane protein ۳۶kDa (OMP۲b) in E. coli

زمینه و هدف: بروسلوز یکی از مهم ترین بیماری های زئونوز بوده که منجر به ضررهای اقتصادی فراوانی می شود. گونه بروسلا، باکتری های کوکوباسیل گرم منفی داخل سلولی هستند که قادر به تکثیر در فاگوزوم های ماکروفاژها می باشند و در بسیاری از گونه های حیوانی و انسان ها بیماری ایجاد می کنند. پیشگیری و تشخیص، هر دو لازمه ریشه کنی این بیماری می باشند. شناسایی و ارزیابی آنتی ژن های متفاوت سلول بروسلا در پیشبرد برنامه های پیشگیری و تشخیص نقش کلیدی دارند. در این تحقیق تولید و تخلیص پروتئین غشای خارجی ۳۶ کیلو دالتونی نوترکیب (Omp۲b) بروسلا آبورتوس به انجام رسید. مواد و روش ها: ژن پروتئین غشای خارجی ۳۶ کیلو دالتونی بروسلا آبورتوس توسط آنزیم PrimeSTAR® HS DNA polymerase تقویت و در pJET۱.۲ کلون و ژن هدف در (+)pET۲۸a ساب کلون شد. pET۲۸a نوترکیب در E.coli BL۲۱ (DE۳) ترانسفورم شد. بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از ۱ میلی مولار IPTG القا و پروتئین های حاصله توسط وسترن بلات بررسی شدند و Omp۲b نوترکیب توسط آنتی سرم خرگوشی بروسلا ردیابی شدند. نتایج: ظهور باند قهوه ای-طلایی در جایگاه واکنش در وسترن بلات تاییدی بر کلون و بیان موفقیت آمیز بود. ما با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، Omp۲b نوترکیب را تخلیص کردیم که این روش پروتئین های ریفولد شده را بر روی ستون فراهم کرد. نتیجه گیری: Omp۲b با موفقیت کلون، بیان و تخلیص شد. پروتئین های نوترکیب توسط آنتی سرم پلی کلونال شناسایی شدند که این امر صحت پروسه را تایید می کند.

کلیدواژه ها:

Brucella abortus ، Cloning ، Expression ، Omp۲b ، بروسلا آبورتوس ، کلون ، بیان ، Omp۲b