ارزیابی اثرات siRNA بر سطح بیان ژن Snail۱ و miR۱۴۳ در سلول‫های متاستاتیک سرطان سینه‬‬‬‬‬

هدف: در دهه های گذشته تلاش های زیادی با هدف جستجوی ابزارهای جدید جهت درمان سرطان صورت گرفته است. در این راستا، کشف، بررسی و کاربرد تکنیک‫های مرتبط با RNA های مداخله گر کوچک (siRNA) یکی از قابل توجه ترین پیشرفت‪ها در زمینه شناسایی و درمان سرطان  بوده است. RNA  مداخله گر کوچک که گاهی بهعنوان RNA مداخله گر کوتاه یا RNA خاموش کننده نیز شناخته می شود، معمولا ۲۱ جفت باز طول دارد و با تجزیه mRNA پس از رونویسی، با بیان ژن های خاص با توالی های نوکلئوتیدی مکمل تداخل می کند و از ترجمه جلوگیری می کند. مطالعات بسیاری نشان داده اند که siRNA ها بر تنظیم بیان برخی ژن ها که در سرطان ها نقش دارند تاثیرگذار می باشند. siRNA ها بر فاکتورهای رونویسی  Snailکه در تهاجم و متاستاز سلول های سرطانی و miR-۱۴۳ که در پاتوژنز سرطان ها نقش مهمی دارند موثر هستند. miRNA ها همراه با عوامل رونویسی می توانند مسیرهای بیولوژیکی دخیل در سرطان زایی را مختل کنند. حال آنکه ، اثر دقیق ها siRNA بر بیان ژن های snail۱ و miRNA-۱۴۳ در سلول های سرطانی سینه کاملا روشن نیست. بر این اساس مطالعه حاضر به بررسی اثراتsiRNA  بر snail۱ و miRNA-۱۴۳  بر سلول های سرطان سینه پرداخته است.مواد و روشها: در این تحقیق تجربی-آزمایشگاهی سلول های سرطانی سینه رده MDA-MB-۴۶۸ انستیتو پاستور ایران خریداری شدند. سلول ها در محیط کشت RPMI-۱۶۴۰ حاوی ۱۰% FBS کشت داده شدند. جهت تیمار سلول های سرطانی با siRNA  اختصاصی، کیت ژن  Snail۱(Santacruz biotechnology California, USA) مورد استفاده قرار گرفت. سلول ها به دو گروه کنترل (عدم تیمار) و سلول های تیمار شده (ترانسفکت شده با siRNA) تقسیم بندی شدند. به منظور مشخص کردن زمان موثر، سلول ها تحت تاثیر دوز ۶۰پیکومول  siRNA به مدت ۲۴، ۴۸ و ۷۲ ساعت قرار گرفتند. پس از بررسی بیان ژن و به دست آمدن زمان موثر در ادامه به منظور به دست آوردن دوز موثر سلول ها با سه دوز ۴۰، ۶۰ و ۸۰ پیکومول تیمار شدند. از ژن بتا اکتین به عنوان ژن کنترل داخلی استفاده شد. مورفولوژی سلول های متاستاتیک MDA-MB-۴۶۸ با استفاده از میکروسکوپ نوری قبل و بعد از ترانسفکت ژن اختصاصی مورد بررسی قرار گرفتند. تکثیر سلول ها با رنگ آمیزی تریپان بلو بررسی شد. سطح بیان ژن snail۱ و miR-۱۴۳ توسط qRT-PCR ارزیابی شد. داده ها با استفاده از آزمون تی – تست تجزیه و تحلیل شدند.نتایج: در این مطالعه در سلول های سرطانی سینه رده MDA-MB-۴۶۸ سطح نسبی بیان ژن Snail۱ در زمان موثر ۴۸ ساعت و در مواجهه با دوز موثر ۶۰ پیکومول دچار کاهش معنی داری شد (P <۰.۰۰۰۱). اما ناک داون ژن Snail۱ توسط siRNA اختصاصی در سلول های سرطانی رده  MDA-MB-۴۶۸درمواجهه با دوز موثر۶۰ پیکومول و زمان موثر ۴۸ ساعت سبب افزایش سطح بیان نسبی ژن miR-۱۴۳ در مقایسه با گروه کنترل شد (P <۰.۰۰۰۱). همچنین میزان رشد سلول های سرطانی  MDA-MB-۴۶۸با ناک داون ژن Snail۱ کاهش پیدا کرد.نتیجه گیری: نتایج حاصل از این پژوهش نشان دادند که ترانسفکت سلول های سرطان سینه رده                 MDA-MB-۴۶۸ توسط siRNA اختصاصی با اثرات کاهشی و افزایشی که بر سطح بیان ژن Snail۱ و ژن miR-۱۴۳  داشته است می تواند به طور موفقیت آمیزی سبب کاهش تکثیر و تهاجم سلول های سرطان سینه می شود.

کلیدواژه ها:

snail۱ ، siRNA ، miR-۱۴۳ ، سرطان سینه