اثر ویتریفیکاسیون بر زنده مانی بذور L. Medicago polymorpha نگهداری شده در شرایط فراسرد

در این پژوهش برای دستیابی به روشی موفق جهت نگهداری طولانی مدت بذور در شرایط دمای فراسرد از روش ویتریفیکاسیون استفاده شد. بدین منظور از بذور یونجه یکسالهMedicago polymorpha L.  که در دمای °C۴ سازگاری سرمایی یافته بودند استفاده گشت. بذور با قرار گرفتن در مجاورت سیلیکاژل در دسیکاتور برای ۴ روز آبگیری شدند. سپس جهت حفاظت اسمزی به مدت ۲۰ دقیقه در دمای °C۲۵ با محلول گلیسرول M۲ در ساکاروز M ۶/۰ بارگیری گشتند. بذور بارگیری شده به منظور دهیدراتاسیون و حفاظت به کرایوویال های حاوی ml ۵/۰ محلول PVS۲ صفر درجه سانتی گراد انتقال یافته و بلافاصله در نیتروژن مایع ذخیره شدند. کرایوویال های حاوی نمونه پس از یک هفته از نیتروژن مایع خارج گشتند و بلافاصله در حمام آبی C°۳۷ به مدت ۲ دقیقه گرمادهی شدند. در مرحله بعد به منظور آبدهی و شستشوی مواد نگهدارنده به ترتیب به مدت ۵، ۱۰ و ۱۵ دقیقه در دمای °C ۲۲ در داخل محلول شستشوی حاوی سوکروز M ۲/۱ در نمک های محیط کشت MS قرار گرقتند. بازیابی نمونه ها به سه روش صورت گرفت: (الف و ب) قرار دادن بذور به مدت نیم ساعت و ۲۴ ساعت در زیر آب جاری و سپس انتقال آنها بر روی پتری دیش های حاوی کاغذ صافی مرطوب به منظور تولید دانه رست، (ج) استریل بذور با استفاده از هیپوکلریت سدیم ۲% و سپس انتقال آنها به محیط کشت جامد MS حاوی mg/lit ۵/۰ GA۳. درصد زنده مانی بذور نگهداری شده در دمای فراسرد در روش های بازیابی الف و ب (به ترتیب ۳۷/۹۴% و ۲۱/۹۸%) در سطح ۵% با شاهد (بذوری که تحت تیمار فراسرد قرار نگرفتند) دارای اختلاف بود درحالیکه، این اختلاف در روش ج (زنده مانی ۱۶/۷۶%) فاقد اختلاف معنی دار بود. 

کلیدواژه ها:

آبگیری ، بذر ، نگهداری بلند مدت بذر ، نگهداری در دمای فراسرد ، نیتروژن مایع ، ویتریفیکاسیون ، یونجه یکساله ، PVS۲