تخریب core promoter ژن PARVA با روش CRISPR

پروتئین های PARVIN متعلق به دسته ی پروتئین های آداپتور هستند که در تنظیم شکل و اندازه ی سلول ها نقش دارند و به سه گروه تقسیم می شوند. نوع آلفای آن ، PARVA نامیده می شود و در فرآیند رگ زایی ، اهمیت زیادی دارد. عدم تعادل در PARVA میتواند در گسترش سرطان ریه تاثیرگذار باشد. بنابراین تنظیم بیان آن دارای اهمیت است. یکی از نواحی مهم برای تنظیم بیان ژن ها و به دنبال آن تولید پروتئین ، ناحیه ی پروموتر مرکزی ( core promoter ) میباشد . از آنجایی که در این ناحیه ، جایگاه شروع رونویسی تعبیه شده است ، گزینه ای مناسب برای دستکاری بیان ژن میباشد. تکنیک CRISPR یک تکنولوژی قدرتمند برای ایجاد دستکاری های ژنتیکی است که در سال های اخیر بسیار مورد قرار گرفته است. ما در این مطالعه قصد داریم با استفاده ازCRISPR ، در ناحیه ی core promoter ژن PARVA ، جهش ایجاد کنیم. روش کار: الیگونوکلئوتیدهای طراحی شده با استفاده از سایت ATUM پس از دورشته ای شدن و اتصال به وکتور خطیشده ، درون سلول های میزبان (.FROL +۵ منتقل شدند . نتایج یافته ها با استفاده از ژل الکتروفورز، آزمایش PCR بررسی شدند. آنالیز ژل الکتروفورز، تشکیل حالت دو رشته ای gRNA و آزمایشPCR همسانه سازی موفقیت آمیز ژن PARVA را در وکتور ثابت کرد. به منظور سنجش کارایی وکتور نوترکیب ، ناقل مذکور در رده ی سلولی HEK۲۹۳ ترانسفکت گردید.نتایج PCR با استفاده از DNA استخراج شده از سلول های نوترکیب، حذف ناحیه پروموتور مرکزی را نشان داد. استفاده از تغییرات اصلاحی دقیق در ژنوم ، اهدافی از جمله تخریب آنکوژن ها و ژن درمانی را میسر می کند.

کلیدواژه ها:

ژن ، CRISPR ، PARVA ، core promoter ، PCR