بهینهکردن تولید شکل محلول آنزیم ال-آسپاراژیناز باکتری نمکدوست بهطور نوترکیب در اشریشیا کلی
سال انتشار: 1399
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 250
فایل این مقاله در 13 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BJM-9-35_005
تاریخ نمایه سازی: 19 اردیبهشت 1400
چکیده مقاله:
مقدمه: آنزیم ال-آسپاراژیناز (EC ۳.۵.۱.۱) نقش مهمی در درمان سرطان و بهویژه لوسمی حاد لنفوئیدی دارد. حذف سریع آنزیم از جریان خون، فعالیت گلوتامینازی و همچنین ایجاد واکنش ایمنی در بدن از معایب آنزیمهای تجاری است و ازاینرو، شناسایی ال-آسپاراژینازهای جدید با ویژگیهای مطلوب ضروری است. ژن بیانکننده ال-آسپاراژیناز مشتقشده از باکتری نمکدوست هالوموناس الانگاتا که پیشتر ویژگیهای مطلوب آن بهمنظور درمان سرطان گزارش شده بهشکل نوترکیب در اشریشیا کلی تولید شده است؛ اما بخش اعظم پروتئین نوترکیب بهشکل نامحلول در سلول باقی میماند. مواد و روشها: در مطالعه حاضر، ابتدا دو میزبان اشریشیا کلی BL۲۱ (DE۳) و ArcticExpress (DE۳) برای بیان پروتئین بهشکل محلول مقایسه شدند. پساز انتخاب میزبان، اثر عوامل مختلف ازجمله محیطکشت، غلظت القاکننده، میزان مایه تلقیح، زمان و دمای القا و میزان هوادهی به روش یک فاکتور در زمان بهینه شد. نتایج: بر اساس یافتهها، بیشترین مقدار تولید ال-آسپاراژیناز فعال مربوط به میزبان اشریشیا کلی BL۲۱ (DE۳) در محیط کشت LB با افزودن ۱ درصد مایه تلقیح، ۵/۰ میلیمولار IPTG و سرعت برهمزدن ۱۵۰ دوربردقیقه حاصل شد؛ همچنین بیشترین فعالیت ویژه ال-آسپاراژیناز به بیان در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد و برای مدت زمان ۹ ساعت تعلق داشت. در مرحله بعد، اثر افزودنیهای مختلف به محیطکشت بررسی و مشاهده شد افزودن ۲ درصد اتانول و ۲۰۰ میلیمولار آرژینین تاثیر چشمگیری بر افزایش فعالیت ویژه آنزیم دارد. بحث و نتیجهگیری: درنهایت، اعمال شرایط بهینه سبب افزایش مقدار فعالیت ویژه از حالت پایه تقریبا ۱۰۰۰ واحدبرمیلیگرم به حدود ۳۵۰۰ واحدبرمیلیگرم (بیش از سه برابر) شد.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
یاسمن اسعدی
دانشجوی دکتری گروه بیوتکنولوژی، پردیس علوم، دانشگاه تهران، ایران
ریحانه خالقی
دانشجوی دکتری گروه بیوتکنولوژی، پردیس علوم، دانشگاه تهران، ایران
صدیقه اسد
استادیار گروه بیوتکنولوژی، پردیس علوم، دانشگاه تهران، ایران
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :