طراحی و بیان کایمری پپتید لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین گاوی با هدف تولید نوترکیب این پروتئین در گیاه توتون

لاکتوفرین که شامل پپتیدهای لاکتوفرامپین و لاکتوفریسین می‌باشد یکی از گلیکوپروتئین‌های شیر با خواص ضد میکروبی است. لاکتوفرین به عنوان جزء ذاتی سیستم ایمنی مطرح بوده و اولین سد دفاعی در برابر حملات میکروبی را نشان می‌دهد. هدف از این پژوهش سنتز کایمری این دو زیر واحد پپتیدی و ارزیابی تاثیر پپتید نوترکیب تولید شده روی پاتوژن‌های شاخص مواد غذایی بود. توالی کایمری لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین پس از بهینه شدن بر اساس کدون ترجیحی بیان شونده در گیاه توتون، به صورت مصنوعی درون وکتور  pGHسنتز شد و سپس به وکتور بیانی pBI121 منتقل گردید. پلاسمید بیانی نوترکیب از طریق فرآیند ذوب و انجماد به باکتری آگروباکتریوم ریزوژنز منتقل شد. در نهایت با کمک روش دیسک برگ به گیاه توتون منتقل گردید. استخراج پروتئین نوترکیب از گیاه توتون با استفاده از روش Tris-HCl انجام و فرآیند تخلیص با استفاده از کروماتوگرافی ستون‌های نیکل آگارز انجام شد. آزمایش MIC در میکروپلیت 96 خانه استریل و با روش رقیق سازی انجام شد .در نهایت نتایج نشان داد که مقدار پروتئین نوترکیب 52/1 میلیگرم در میلی‌لیتر می‌باشد و کیفیت مطلوبی نیز دارد. همچنین نتایج نشان داد که ترکیب کایمری اثر بازدارندگی خوبی روی میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا دارد.  

کلیدواژه ها:

Lactoferrampine - Lactoferricin ، Recombinant protein ، Tobacco ، Agrobacterium rhizogenes ، آگروباکتریوم ریزوژنز ، پروتئین نوترکیب ، گیاه توتون ، لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین .