خالصسازی و تعیین ویژگیهای آمیلوپولولاناز مقاوم به حلال و نمکدوست خارج سلولی جدا شده از آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25
سال انتشار: 1392
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 356
فایل این مقاله در 14 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BJM-2-7_002
تاریخ نمایه سازی: 4 بهمن 1399
چکیده مقاله:
مقدمه : نمکدوستها، به ویژه هالوآرکیها یکی از مهمترین گروههای میکروارگانیسمهای افراطیدوست هستند. هیدرولازها ی نمکدوست بسیار مطالعه شدهاند و برای کاربردهای صنعتی و زیست فنآوری مورد توجه هستند. با توجه به اهمیت هیدرولازهای نمکدوست، مطالعه حاضر اولین گزارش در مورد خالصسازی آنزیم آمیلوپولولاناز از یک آرکی نمکدوست است . مواد و روش ها: آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25 آنزیم آمیلوپولولاناز خارج سلولی نمکدوست و مقاوم به حلال را در غلظت بالای نمک سدیم کلراید تولید میکند. به منظور خالصسازی آنزیم، از رسوبدهی پروتئینها با حلال اتانول و کروماتوگرافی تعویض آنیونی استفاده شده وجرم مولکولی آنزیم بعد از تخلیص، به کمک روش SDS - PAGE تعیین شد. بعد از تخلیص آنزیم، ویژگیهای آنزیم بررسی شد. به منظور تعیین پایداری آنزیم در حضور حلالهای آلی، محلول آنزیمی به طور جداگانه در مجاورت هفت حلال آلی قرار گرفت. در انتها محصول عملکرد آنزیم روی دو سوبسترای نشاسته و پولولان به روش کروماتوگرافی لایهی نازک بررسی شد . نتایج: جرم مولکولی آنزیم به کمک روش SDS - PAGE به میزان kDa 140 تعیین شد. بیشینهی فعالیت آمیلولیتیک و پولولیتیک آنزیم در دمای 50 درجه سانتیگراد بود. اسیدیته بهینه برای فعالیت آمیلولیتیکی 0/7 و برای فعالیت پولولیتیکی 5/7 تعیین شد. آنزیم در محدوده وسیع غلظتی صفر تا 5/4 مولار از نمک NaCl فعال بود. اثر حلالهای آلی مختلف روی فعالیت پولولیتیک و آمیلولیتیک آنزیم آمیلوپولولاناز نشان داد که آنزیم در حضور حلالهای غیر قابل اختلاط با آب دارای پایداری بیشتری نسبت به حلالهای قابل اختلاط با آب است. تنها محصول عملکرد آنزیم روی هر دو سوبسترای نشاسته و پولولان، گلوکز تعیین شد . بحث و نتیجه گیری: آرکی نمکدوست Halorubrum سویه Ha25 ، آنزیم آمیلوپولولاناز نمکدوست و گرمادوست را تولید میکند. با توجه به فعالیت آنزیم در شرایطی نظیر دما و شوری بالا و آب فعال کم، این آنزیم گزینهای مناسب به منظور کاربردهای زیست فنآوری، نظیر تیمار پسآبهای داراری شوری بالا، حلالهای آلی و ترکیبات نشاستهای است .
کلیدواژه ها:
آمیلوپولولاناز نمک دوست ، خالصسازی پروتئین ، آرکی نمک دوست افراطی ، Halorubrum ، مقاومت به حلال آلی
نویسندگان
مریم سیروسی
دانشجوی دکتری میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
محمد علی آموزگار
دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
خسرو خواجه
استاد بیوشیمی، دانشگاه تربیت مدرس، ایران
مهران حبیبی رضایی
دانشیار بیوشیمی، دانشگاه تهران، ایران
مصطفی فاضلی
کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایران
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :